吴小香，杨 浩，孟祥瑞，李加慧
(海南大学植物保护学院，热带农林生物灾害绿色防控教育部重点实验室，海口 570228)
阿蠓属AlluaudomyiaKieffer,1913隶属于蠓科Ceratopogonidae蠓亚科Ceratopogoninae蠓族Ceratopogonini(虞以新等,2005)，是一类捕食性蠓类，雌成虫常捕食摇蚊Chironomidae成虫(Downes,1978)，而幼虫栖息在池塘、沼泽、湿地、树洞以及溪流、河流和湖泊等各类水体中(Borkent,2014;Szadziewskietal.,2015)，捕食摇蚊、蚊虫Culicidae及铗蠓Forcipomyiaspp.的幼虫(De Meillon and Wirth,1991;Sarkar and Mazumdar,2019)。本属世界性分布，全球已知201种(Borkent and Dominiak,2020)，共分为环纹阿蠓种团(theannulatagroup)、多斑阿蠓种团(themaculipennisgroup)、石纹阿蠓种团(themarmoratagroup)、巴维阿蠓种团(theparvagroup)、淡黄阿蠓种团(thexanthocomagroup)和纽节阿蠓种团(thedesmagroup) 6个种团(Wirth and Delfinado,1964;虞以新等,2005)。迄今我国共记录阿蠓32种(虞以新等,2005;聂维忠等,2009;刘仰青等,2011;刘仰青等,2021)，隶属于除巴维阿蠓种团和环纹阿蠓种团外的4个种团，其中海南岛共有6种分布，包括多斑阿蠓种团的弯曲阿蠓AlluaudomyiaflexuosaYu &Hao,2005、美岛阿蠓AlluaudomyiaformosanaOkada,1942和边缘阿蠓AlluaudomyiamarginalisWirth &Delfinado,1964，石纹阿蠓种团的柱形阿蠓AlluaudomyiacoluminisLiu,Yan &Liu,1996、龙州阿蠓AlluaudomyialongzhouensisHao &Yu,1991和棘刺阿蠓AlluaudomyiaspinosipesTokunaga,1962(刘金华等,1996)。
环纹阿蠓种团世界记录共15种，8种分布在东洋界(Wirth and Delfinado,1964;Debenham,1971;Giles and Wirth,1984)，但此前在我国未曾报道。经过整理鉴定2018年至2021年在海南岛采集的阿蠓属昆虫，本文首次记录环纹阿蠓种团在中国分布，共包括2种，含一新种和一中国新记录种，现对此2种阿蠓进行描述。
研究标本来自2018年至2021年在海南岛灯光诱集的阿蠓成虫酒精浸泡标本。体式显微镜下初步鉴定后参照Bellisetal.(2013)的方法对所有标本进行无损形态基因组DNA提取，随后制作成玻片标本。
形态学方法：本研究使用奥林巴斯SZX16体式显微镜观察标本，进行解剖和制作玻片标本，并通过连接的CCD(DP72)拍摄虫体轮廓和中胸背板，利用生物显微镜XSP-12CA和CCD(YH5001)对玻片标本进行物种鉴定以及各部分显微特征拍照和测量，利用Adobe Illustrator CC 2018和Adobe Photoshop CC 2018进行雄性生殖器绘制。物种的地理分布图使用Arcmap 10.2软件制作完成(Rinner and Voss,2013)。物种描述中形态术语和测量依据Wirth and Grogan(1988)和Szadziewskietal.(2015)，翅脉和翅室依据Borkent(2017)。测量数据形式为最小值～最大值(平均值，n=检视标本数量)。模式标本和凭证标本均保存于海南大学植物保护学院昆虫标本馆。
缩写词：触角比(AR)，触角鞭节第9～13节总长与鞭节第1～8节总长的比值；
翅前缘脉比(CR)，前缘脉长与翅长的比值；
喙头比(P/H)，喙长与头高的比值；
触须比(PRⅢ)，触须第3节长与宽的比值；
前足跗节比(TRI)、中足跗节比(TRⅡ)、后足跗节比(TRⅢ)，前、中、后足第1跗节与第2跗节的长度比值。
DNA条形码：选择线粒体细胞色素C氧化酶亚基1(mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I,CO I)基因作为DNA条形码基因，利用CO I通用引物(LCO1490:5′-GGTCAACAAATCATAAAG ATATTGG-3′,HCO2198:5′-TAAACTTCAGGGTGA CCAAAAAATCA-3′)(Folmeretal.,1994)进行PCR扩增和测序。PCR扩增体系为25 μL，其中2×Mix 12.5 μL，正、反向引物各为0.8 μL，DNA模板2 μL，ddH2O 8.9 μL。PCR反应程序为：94℃预变性3 min；
94℃变性30 s、45℃退火30 s、72℃延伸1 min，35个循环；
72℃最终延伸5 min。获得的8条CO I基因序列均上传至BOLD(http://www.boldsystems.org/index.php)和GenBank(登录号：ON220856-ON220863)。下载已公开的2种阿蠓的CO I基因序列(巴维阿蠓A.parva，GenBank登录号：JN291539，KM901343，KM920687，KR663659，KR953594，KR955895，MG171582；
四斑阿蠓A.quadripunctata，GenBank登录号：KT278187)，基于Kimura双参数模型(Kimura-2-Parameter,K2P)(Tamuraetal.,2013)，利用MEGA 7.0计算种内和种间遗传距离；
选择Stilobezziaantenalis(GenBank登录号：MG175492.1)为外群，采用邻接法(Neighbor-Joining,NJ)构建系统发育树，并进行自举检验(Bootstrap=1 000)。
2.1 环纹阿蠓种团鉴别特征
翅面多斑，其中r-m脉和r2翅室端部各具1个暗斑，数个小暗斑沿R脉分布，翅后缘有7个暗斑，均压在纵脉上，其中有4个暗斑压在M1、M2、M4和CuA脉近端部，其余3个暗斑分别压在M2、M4脉近基部和A脉端部；
翅面端部通常具大毛；
触角鞭节双色，各节端部常浅色，中部深色，鞭节4～10节基部的浅色环通常较窄；
各足具暗斑或暗色环纹；
雌虫各足爪不相等，1个受精囊，无支囊；
雄性生殖器复杂多样化，通常具踝突。
2.2 拟环纹阿蠓Alluaudomyia pseudannulata Wu & Li sp. nov.(新种)(图1～4、7)
鉴别特征：本新种与环纹阿蠓A.annulata、环足阿蠓A.annulipes具有相似的翅斑和足环纹，雌虫可通过大颚齿数(本种10枚，另2种分别为14和20枚)、中胸背板前缘无深色大斑与另2种区分；
雄虫可通过小盾片上粗鬃数量(本种2根，另2种均为4根)以及本种阳茎中叶中轴呈树状，另2种阳茎中叶中轴无枝突来区分。
物种描述：雌成虫 体长1.94～2.05(1.99，n=2)mm(图1-A)。
头部：头顶黄白色，具11根刚毛；
额顶具一块稍硬化的增厚斑(图2-D)；
P/H 0.61～0.67(0.64，n=2)。复眼相接，小眼面间无柔毛。触角(图2-B)柄节、梗节深褐色，柄节外侧具3根刚毛；
鞭节分13节，第1节深褐色，端部浅色，第2～8节各节两端浅色，中部褐色，第9～12节基部褐色，端部浅色，第13节褐色；
触角长0.70～0.76(0.73，n=2)mm，AR 0.83～0.87(0.85，n=2)。触须(图2-B)褐色，基部2节略浅；
第3节长34～52(41，n=2)μm，PRIII1.83～2.00(1.88，n=2)，近端部具感觉器窝。大颚齿10枚。
胸部：中胸背板(图1-C)浅黄色，各毛基处可见浅褐色斑点。小盾片浅黄色，前缘和后缘中央各具深色小斑，具3～4根粗鬃。后小盾片浅黄色，后缘中部颜色略深。腹板深褐色。
图1 拟环纹阿蠓Fig.1 Alluaudomyia pseudannulata Wu &Li,sp.nov.注：A，雌虫整体侧面观；
B，雄虫整体侧面观；
C，雌虫胸部背面观；
D，雄虫胸部背面观。Note:A,B,Habitus,lateral view;C,D,Thorax,dorsal view (A,C for female;B,D for male).
翅(图2-A)长1.06～1.22(1.14，n=2)mm，宽0.45～0.52(0.49，n=2)mm，CR 0.57～0.60(0.59，n=2)。翅面略带褐色具明显暗斑；
其中近r-m脉被暗斑覆盖，r2翅室端部具1暗斑斜向下延伸至r3翅室中部，R至R3脉上具8个深色小斑，另有7个近圆形暗斑均压于纵脉上，r3翅室近端部和臀室基部各具1块不明显带状暗斑；
R脉、R3脉、翅缘及翅面近端部1/3着生少量大毛。平衡棒白色，端部浅褐色。
足：各足基节和转节褐色；
股节与胫节多褐色窄纹(图2-C)，股节基部约1/3褐色，膝盖浅色；
胫节端部褐色。前足与后足基跗节褐色，中足基跗节两端褐色，中部浅色，其余各跗节浅色。后足胫端鬃7～8根。TRI2.15～2.17(2.16，n=2)，TRII2.89～3.05(3.02，n=2)，TRIII2.89～2.97(2.94，n=2)。爪发达，皆不等长。
腹部：背板淡黄色，第2～8背板每侧分别具3、4、4、4、5、5和2个深色毛基斑(图3-C)。第1～8腹板褐色。受精囊(图3-A)1个，长椭圆形，长102～108(105，n=2)μm，宽49～51(50，n=2)μm，基部密布透明刻点，具短颈。
雄成虫形态特征与雌性基本一致，不同如下：体长1.77～1.90(1.83，n=3)mm(图1-B)。鞭节第1～10节浅色，具褐色轮毛，第11、12节端部浅色，第13节褐色(图2-E)。大颚齿退化。中胸背板中后部具模糊暗斑(图1-D)，毛基色斑较雌性大且色深。小盾片具2根粗鬃。小盾片和后小盾片深色区域面积较雌虫大。翅(图3-B)R脉至R3脉仅具1个深色小斑；
翅面少大毛。爪小，等长。
图2 拟环纹阿蠓Fig.2 Alluaudomyia pseudannulata Wu &Li,sp.nov.注：A，翅；
B，触角和触须；
C，足；
D、E，头(A～D为雌虫；
E为雄虫)。Note:A,Wing;B,Antenna and palpi;C,Legs;D,E,Head (A～D for female;E for male).
图3 拟环纹阿蠓Fig.3 Alluaudomyia pseudannulata Wu &Li,sp.nov.注：A，受精囊；
B，雄虫翅；
C，腹部，侧面观。Note:A,Spermatheca;B,Male wing;C,Abdomen,lateral view.
腹部尾器(图4-A,D)第9腹板长，后缘中部凸起达阳茎中叶的近端部。第9背板长为抱握基节的2/3，基部宽，端部具发达侧突；
尾须发达，着生数根小刚毛。抱握基节基半部粗大，向端部渐细，有发达的腹踝和背踝。抱握端节细长，中等弯曲，端部稍硬化。阳茎中叶(图4-C)硬化，基半部呈宽拱门状，拱臂细长；
拱顶中轴具树状枝突。阳基侧突(图4-D)分离，端部双角突状。
图4 拟环纹阿蠓雄虫腹部尾器Fig.4 Male hypopygium of Alluaudomyia pseudannulata Wu &Li,sp.nov.注：A，尾器，腹面观；
B，尾器(不含阳茎中叶和阳基侧突)，腹面观；
C，阳茎中叶；
D，阳基侧突。Note:A,Hypopygium,ventral view;B,Hypopygium exclude aedeagus and parameres,ventral view;C,Aedeagus;D,Parameres.
词源种名是由拉丁词Pseudo-，假的，伪的，和annulata，环纹阿蠓的种名组合而成，词性为阴性。
DNA条形码测序获得了拟环纹阿蠓2头雌虫和3头雄虫的CO I条形码序列(GenBank登录号：ON220856-ON220860)，序列长度为658 bp，种内遗传距离为0.000～0.002，种内平均遗传距离为0.001。构建的NJ树(图8)拟环纹阿蠓的所有雌性和雄性个体聚为高支持率(100%)的单系。
图8 基于线粒体CO I序列重建阿蠓属昆虫NJ树Fig.8 Neighbor-Joining tree of the genus Alluaudomyia reconstructed based on mitochondrial CO I sequence注：比例尺为遗传距离；
节点左侧数字为自展值。Note:Scale bar represented genetic distance;Numbers on the left of the nodes were the bootstrap values.
正模：♂，海南省儋州市人民公园西南376 m湖边，19.5038°N/109.5208°E，H 137 m，2021-VI-18，吴小香、何泽华，灯诱，cer1109(该编号为玻片标本号，下同)。副模(2♀2♂)：1♂，海南省琼中县湾岭镇，19.1228°N/109.8964°E，H 266 m，2019-VII-28，李春桥，灯诱，cer1057；
1♂，海南省儋州市海南大学儋州校区公寓A-4号南60 m河边，19.5058°N/109.489°E，H 126 m，2020-XI-09，吴小香、杨浩，灯诱，cer1058；
1♀，海南省琼中县黎母山国家森林公园管委会东北815 m河水边，19.1865°N/109.7636°E，H 637 m，2020-XI-20，吴小香、邓斌、何泽华，灯诱，cer1054；
1♀，海南省屯昌县红大岭南255 m草丛，19.3444°N/110.1166°E，H 112 m，2021-V-04，吴小香、邓斌，灯诱，cer1108。
分布国内：海南(琼中、儋州、屯昌)(图7)。
2.3 环足阿蠓Alluaudomyia annulipes Wirth & Delfinado,1964(中国新记录种)(图5～图7)
图5 环足阿蠓Fig.5 Alluaudomyia annulipes Wirth &Delfinado,1964注：A，雄虫整体侧面观；
B，雄虫胸部背面观；
C，受精囊；
D、E，翅；
F，足(A、B、E为雄虫；
C、F为雌虫)。Note:A,Habitus,lateral view;B,Thorax,dorsal view;C,Spermatheca;D,E,Wing;F,Legs (A,B,E for male;C,F for female).
图6 环足阿蠓雄虫腹部尾器Fig.6 Male hypopygium of Alluaudomyia annulipes Wirth &Delfinado,1964注：A，尾器，腹面观；
B，尾器(不含阳茎中叶和阳基侧突)，腹面观；
C，阳茎中叶；
D，阳基侧突。Note:A,Hypopygium,ventral view;B,Hypopygium exclude aedeagus and parameres,ventral view;C,Aedeagus;D,Parameres.
图7 海南岛环纹阿蠓种团的物种地理分布Fig.7 Distribution of the annulata group in Hainan island
AlluaudomyiaannulipesWirth &Delfinado,1964:637.Type locality:Songkla,Thailand.
AlluaudomyiaannulipesaustraliensisDebenham,1971.Type locality:Queensland,Australia.
鉴别特征与环纹阿蠓、拟环纹阿蠓色斑相似，本种雌虫可通过大颚齿数量(见拟环纹阿蠓鉴别特征)和宽大的受精囊与另2种区分；
本种雄虫的阳茎中叶具有极长的中轴，可与阿蠓属的其它物种相区分。
物种描述雌成虫
头部：头顶褐色。触角柄节和梗节深褐色；
鞭节分13节，第2、3节浅色，第4～9节两端浅色，中部褐色，第10～12节端部浅色，末节褐色；
触角长0.74 mm，AR 0.86。触须端部2节色深；
第3节长36 μm，PRIII1.89，近端部具感觉器窝。大颚齿20枚。
胸部：中胸背板前缘具深色大斑，两肩淡色，其余皆为浅黄色，各毛基处可见深色小斑。小盾片前缘和后缘中部褐色，其余皆为淡黄色，具 4根粗鬃。后小盾片中后部褐色，其余皆为淡黄色。
翅长1.27 mm，翅宽0.73 mm，CR 0.64。翅斑(图5-D)与拟环纹阿蠓基本一致，但M4脉基部的暗斑更靠近中脉叉，翅面近端部大毛着生位具深色小斑点。平衡棒白色，端部浅褐色。
足：各足基节和转节褐色；
股节和胫节具相间褐纹(图5-F)，膝盖浅色。前足与后足基跗节褐色，中足基跗节两端及第4、5跗节略带褐色，其余跗节淡色。后足胫端鬃7根。TRI1.79，TRII2.97，TRIII3.19。爪发达，不等长。
腹部：腹部浅黄色；
第2～8背板每侧各具 3～5个深色毛基斑。受精囊1个(图5-C)，椭圆形，长141 μm，无颈，基部有透明刻点。
雄成虫体长1.31～1.55 mm(1.43 mm，n=2)(图5-A)。
基本特征与雌性一致，以下特征不同：中胸背板前缘色斑较深(图5-B)。翅(图5-E)R脉至R3脉仅具1个深色小斑；
翅缘着生稀疏大毛。爪小，等长。第9腹板后缘平直(图6-B)。第9背板长为抱握基节的2/3，侧突发达；
尾须发达(图6-B)。抱握基节细长，具踝突，抱握端节长约为抱握基节的1/2，近中部开始弯曲(图6-B)。阳茎中叶基部窄拱门状，拱顶中轴杆状，极为细长，约为2倍拱高，末端双叉状，向腹面弯曲(图6-C)。阳基侧突分离，细长，基臂短，端部钝圆具一刺状突起(图6-D)。
DNA条形码测序获得了环足阿蠓1头雌虫和2头雄虫的DNA条形码(GenBank登录号：ON220861-ON220863)，序列长度为658 bp。环足阿蠓种内平均遗传距离为0.019，种内遗传距离为0.002～0.028。环足阿蠓的雌虫和雄虫除了生殖器不同外，翅斑也存在明显不同，单凭形态特征难以将雄性与雌性个体进行配对，通过测定DNA条形码，构建系统发育树(图8)，成功将两性个体成功配对，所有个体聚为高支持率(100%)的一支。
检视标本(1♀2♂)1♀，海南省屯昌县枫木镇，19.2762°N/110.0234°E，H 262 m，2018-XI-04，李春桥，灯诱，cer296；
1♂，海南省琼中县湾岭镇224国道树林边的水渠旁，19.1342°N/109.9055°E，H 359 m，2021-V-16，何泽华，灯诱，cer1130；
1♂，海南省儋州市那大镇云月湖公园224 m湖边，19.5001°N/109.5108°E，H 124 m，2021-VI-18，吴小香、何泽华，灯诱，cer1145。
分布：国内：海南(琼中、儋州、屯昌)(图7)。
国外：马来西亚，泰国，澳大利亚。
表1 阿蠓属种间和种内遗传距离Table 1 Interspecific and intraspecific genetic distance of the genus Alluaudomyia
基于CO I条形码，拟环纹阿蠓的种内遗传距离为0.000～0.002，环足阿蠓为0.002～0.028，与蠓亚科种内差异范围为0.000～0.040相符(Ander,2013;Nielsen and Kristensen,2015)，远小于阿蠓种间遗传距离(0.107～0.215)，而且最大的种内遗传距离与最小的种间遗传距离不重叠，存在明显的物种间隙，足以区分这4种阿蠓。此外，基于CO I条形码构建的系统发育树，4种阿蠓均各自聚为一枝，与形态学鉴定结果一致。这说明CO I条形码在阿蠓近似种的分类鉴定方面具有较高的应用价值。
部分阿蠓属物种存在明显的性二型性，雌、雄性别的配对较为困难，单纯依靠形态特征进行，通常需检视大量标本，分析采集信息和相关信息，且容易鉴定为不同种(Wirth and Delfinado,1964;Debenham,1971)。本研究中两种阿蠓均存在明显的性二型现象，雌虫与雄虫的翅斑存在明显差异，且雌虫与雄虫采自不同地点，仅依靠形态特征难以完成雌雄配对。本研究通过测定CO I 条形码成功实现不同性别个体配对，证明DNA条形码技术可以解决性二型的物种不同性别配对的难题。
致谢：感谢海南大学林晓丹博士绘图过程中给予指导，感谢中山大学贾凤龙教授、张丹丹副教授对本文提出的宝贵意见。
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