张 溪,南金鱼,张翠花,张若玉,王新强
(酒泉市畜牧兽医总站,甘肃 酒泉 735000)
猪圆环病毒(PCV)是以免疫抑制为主要特征的病毒性传染病,临床表现较为复杂,可严重侵害性免疫器官,导致机体免疫系统免疫的高度抑制,使疫苗免疫失效,机体免疫力减弱或消失,目前已确认PCV有4种基因型PCV1、PCV2、PCV3、PCV4。
其中PCV2和PCV3可引起断奶仔猪的多系统衰竭综合征、皮炎肾病综合征、母猪的繁殖障碍、仔猪的先天性震颤以等一系列疾病给养殖户造成巨大经济损失。为摸清我市PCV2和PCV3流行情况,笔者采用荧光RT-PCR的方法对酒泉市2023年辖区内采集的猪肺脏、扁桃体、颌下淋巴结、粪便、血清等样品进行了PCV1、PCV2核酸检测,并对检测结果进行流行病学分析,为疫病的预警和防控提供科学依据。
1.1 调查猪圆环病毒样品来源
在辖区内随机抽取19个规模化养殖场、38个散养户、4家屠宰场共采集猪肺脏、扁桃体、颌下淋巴结等组织样品220份、粪便样品250份、血清样品230份,共650份样品,其中肃州区、金塔县、玉门市、瓜州县、敦煌市各130份。
1.2 调查猪圆环病毒的主要试剂
采购青岛立见生物科技有限公司猪圆环病毒2型和3型双重荧光PCR检测试剂盒和DNA/RNA病毒基因提取试剂盒。
1.3 调查猪圆环病毒主要仪器
德国ABI Applied Biosystems公司型号为Step One的荧光PCR检测仪。
1.4.1 对猪圆环病毒血清样品的处理 用12000r/min的高速冷冻离心机,将0.5 mL血清,离心3 min,并取上清液200 μL。
1.4.2 对猪圆环病毒组织样品的处理 将猪肺脏、扁桃体、颌下淋巴结等组织剪下黄豆大小的体积,并加入5倍约1～2 mL生理盐水,用组织研磨器制成组织匀浆液,取0.5 mL以上液体,用12 000 r/min的高速冷冻离心机,离心3 min,并取上清液200μL。
1.4.3 对猪圆环病毒粪便处处理 取体积约黄豆大小的粪便。加入5倍约1～2 mL生理盐水,充分混匀后,取0.5 mL以上液体,用12 000r/min的高速冷冻离心机,离心3 min,并取上清液200 μL。
1.5 RT-PCR检测
1.5.1 对猪圆环病毒样品的提取与扩增 DNA/RNA病毒基因提取试剂盒说明书依次提取出650份待检样品DNA,并按照PCV2和PCV3双重荧光PCR检测试剂盒说明书配制扩增试剂,在 Step One型荧光PCR仪上按照说明说要求设定具体的反应条件,PCV2在FAM通道下收集荧光信号,PCV3在VIC通道下收集荧光信号。
1.5.2 对猪圆环病毒检测结果的判定 分别在FAM和VIC 信号通道下,每份样品的扩增结果有典型的扩增曲线且Ct值≤38时可判定为PCV2或PCV3核酸阳性,Ct值>40或无Ct值时可判定为PCV2或PCV3核酸阴性;当样品38 对650份样品进行PCV2和PCV3双重荧光PCR核酸检测,共检测出PCV2核酸阳性样品101份(扩增图1～2),阳性率为15.54%, 检测出PCV3核酸阳性样品37份(扩增图3～4), 阳性率为5.69%。 图1 PCV2 RT-PCR检测扩增图图2 PCV2 RT-PCR检测扩增图 图3 PCV3 RT-PCR检测扩增图图4 PCV3 RT-PCR检测扩增图 对不同区域的650份样品PCV2和PCV3的检测结果进行分析,结果如表1所示,PCV2和PCV3总体阳性率感染为21.23%,其中玉门市阳性率最高为28.46%;其次是肃州区23.08%;金塔县22.31%;瓜州县和敦煌市均为16.15%,表明PCV2和PCV3在酒泉市的5个农业县均有发生,但感染情况在不同区域差异较大。根据检测结果所示,PCV2的阳性率感染为15.54%,高于PCV3的阳性感染率5.69%,表明PCV2在酒泉地区流行更为普遍,PCV2的阳性感染率玉门市最高20%;金塔县次之,为18.46%;肃州区16.15%;敦煌市12.31%;瓜州县10.77%。PCV3的阳性率玉门市最高8.46%;肃州区次之,为6.92%;瓜州县5.38%;敦煌市和金塔县都为3.85%。 表1 不同区域PCV2、PCV3的检测结果 对不同养殖规模的650份样品PCV2和PCV3的检测结果进行分析,结果如表2所示,在不同养殖规模下的PCV2和PCV3总体阳性率存在较大差异,散养户最高,达31.43%;规模场次之,为20.59%;屠宰场为2%。PCV2的阳性感染率差距也较大,散养户为24.29%;规模场为14.12%;屠宰场2%。PCV3的阳性感染率差距较小,散养户为7.14%;规模场为6.47%;屠宰场为0。表明不同饲养方式PCV2和PCV3阳性率的影响较大,散养户标准化程度低,饲养管理粗放,防疫不达标,消毒不彻底,其阳性感染率较高。 表2 不同养殖规模的PCV2、PCV3的检测结果 对不同生长阶段的650份样品PCV2和PCV3的检测结果进行分析,结果如表3所示,保育猪的阳性率最高33%;育肥猪19.23%;仔猪18.33%母猪15%;种公猪10%。PCV2和PCV3在不同生长阶段的阳性分布排序与总体排序一致。表明猪群在不同生长阶段对PCV2和PCV3的易感性存在差异,保育猪更容易感染PCV2和PCV3。 根据检测结果表明PCV在酒泉市已成为多发性疾病,其中PCV2比PCV3的感染更常见。通过对不同区域、不同养殖规模、不同生长阶段的19个规模化养殖场、38个散养户、4家屠宰场共采集猪肺脏、扁桃体、颌下淋巴结等组织样品220份、粪便样品250份、血清样品230份,进行PCV2和PCV3核酸检测,共检出阳性样品138份,阳性率为21.23%,阳性场户32个,PCV2的阳性率感染为15.54%,PCV3的阳性感染率为5.69%,表明PCV2的流行比PCV3更普遍、阳性感染率更高,但在不同区域、不同规模猪场的危害程度和流行情况存在一定的差异。规模养殖场的总体阳性感染率为20.59%,散养户为31.43%,表明部分散养户饲养管理情况水平低对猪病的预防控制能力较弱,大多数规模场制定了疫苗免疫规程序并能按程序开展免疫工作,且养殖场的建设标准化程度高,管理科学,对猪病的预防控制能力较强。流行病学调查期间,发现PCV2和PCV3的感染,以保育猪(断乳至60～75日龄)最易感,断奶应激可能是重要的诱导因素,可引发断奶仔猪衰竭综合征,具体表现为断奶之后的小猪出现持续性、渐进式的消瘦,发育成长慢,皮毛粗乱,有时候会有咳嗽、喘气等症状。体表还通常伴有淋巴结肿大,特别是腹股沟的淋巴结,少数会出现腹泻。 该病在临床上无特效药物治疗,发病后可使用广谱抗菌药物,减少并发感染,降低死亡率,及时开展临床监测和实验室检测是防控该病的重要环节,通过加强饲养管理、全面均衡的营养、控制并发症和继发感染、及时注射疫苗等方法来降低疫病的爆发。2.1 对猪圆环病毒样品的荧光PCR检测
2.2 不同区域的PCV2和PCV3流行特点分析
2.3 不同养殖规模的PCV2和PCV3流行特点分析
2.4 不同生长阶段的PCV2和PCV3流行特点分析