◎ 李 艳，王慧欣，白俊花，吴 贤，李艳梅
（1.伊金霍洛旗检验检测中心，内蒙古 鄂尔多斯 017200；
2.伊金霍洛旗农畜产品质量安全中心，内蒙古 鄂尔多斯 017200）
菌种检验是开展微生物学检验中的一种常规技术。菌种检验主要是设置一个人工条件，以评估菌种的安全性，降低菌种的变异率，确保其能够在较长时间内维持安全水平。在实验室管理与检验控制中，菌种的标准化检验是关键保障。其中，标准菌株管理工作，包括但不限于菌种管理、菌株来源、标准菌株试验条件等。
1.1 食品微生物检验菌种保藏的目的
在开展微生物学实验工作时，菌种保存是一项基础性工作。在微生物实验工作中的多个环节，均需要菌种的支持，包括但不限于细菌染色、细菌分离培养等。通过合理保存菌种，可以保障菌种的生物学特征，防止菌种出现退化、污染、死亡等问题，为后续的科研工作创造有利条件[1]。
1.2 食品微生物检验菌种保藏的原理
开展菌种保藏工作时，需要利用菌种的生化特性和生理特性，创设最有利于菌种进入休眠状态的环境条件，包括但不限于低温环境、干燥环境、氧气环境等。如此一来，可降低菌种的代谢活动，有效避免菌种出现变异问题，使菌种达到长期保存的效果。通过科学保存菌种，可以保证菌种呈现更高的存活率以及更优质的特性。此外，进行菌种保藏时，也需要权衡经济性和简便性。
在食品微生物检验中，工作人员要确定具体的检测方法，开展多方面、多角度的质量控制，对食品中的各类元素种类和数量进行判断，包括微生物、毒素等，并在定性分析和定量分析的基础上，评价食品卫生质量。目前，在食品质量管理中，食品微生物检验有着十分重要的作用，通过合理开展食品微生物检验工作，有利于规避食品问题，保护人体健康。另外，食品微生物检验是衡量食品卫生质量的重要标准。食品微生物检验可针对食品生产、食品加工、食品运输、食品保藏等多个环节加以检测，判断食品安全质量[2]。
3.1 标准菌株的验收
在接收菌株入库期间，工作人员需要重点检查包装，观察外包装材料是否存在损坏、其是否仍在保质期内，以及是否采取的冷冻运输方式。如果以上内容均符合条件要求，工作人员就可以进行入库备案处理，并详细记录各项相关数据信息，包括但不限于接种时间数据信息、名称数据信息、产地数据信息、编号数据信息、接收单位数据信息、实验室名称数据信息等。
3.2 各类标准培养物
（1）在储备菌株时，工作人员需要对其进行生化鉴定试验并开展纯化试验。需要注意的是，不能直接运用冻结的标准储存菌种，而要提前解冻标准储备菌种。同时，建立记录文件，保证菌种在利用、传代、保藏等方面均能有所追溯。
（2）控制菌株的传代培养次数。在实践中，工作人员需遵循标准方法中的规定，严格将菌株的传代培养次数控制在5 次以内。
（3）重点关注已经发生衰老、退化、突变、污染等问题的标准菌种。针对此类菌种，如果已完成鉴定检验，确定其已经不符合标准，则可以对其进行销毁处理。
（4）判断标准菌种。一般来说，工作菌种都是在标准菌种基础上繁殖的商业派生菌种。商业化质控菌株一般从标准菌种机构中选取。
4.1 传代保存方法
传代保存方法更适用于工作菌种的保藏。实践中，工作人员需要分析菌种的特性，选择适合菌种生长的培养基。一般来说，纯化菌种转接，更加适用于平板培养基、琼脂斜面培养基、半固体培养基、液体培养基。实践中，工作人员需设置好温度和时间，展开培养，然后对管塞部分使用封口膜进行包扎处理，并设置4 ℃的冰箱温度加以保存。此外，在实际操作中，对于创伤弧菌、副溶血性弧菌等，则需要采取室温保存方式。
在应用传代保存方法的过程中，面对不同的微生物种类，设置的保存时间也存在差异。一般情况下，保存时间为1 周至3 个月不等。然而，传代保存方法的应用，仅适用于一些短期内使用的菌种。具体来看，在传代保存方法应用中，虽然整体操作比较简单，但是由于存在菌种多次传代相关问题，很容易造成菌种的变质，改变菌株的特性[3]。对此，工作人员需要限制菌种的传代次数，一般需控制在5 次以内。
4.2 低温冷冻保藏方法
在应用低温冷冻保藏方法时，需要在-60～-80 ℃的低温冰箱内对菌种进行保藏，以此减缓菌种的生理活动。在实践中，低温冷冻保藏方法更加适用于一些需要长期保藏的菌种。因为大多数微生物在-60 ℃中，都会停止新陈代谢。一般情况下，设置的冷冻温度越低，能够达到的效果也就越好。同时，在应用低温冷冻保藏方法时，为了得到满意的冷冻效果，需要准备2.0 mL 的菌种冻存管，避免出现冰箱故障问题和停电事故。如此一来，当保藏菌种的低温冷冻环境发生变化后，工作人员能够及时加入干冰，以此防止培养物的融化。如果菌株已经解冻，则不能直接对菌种再次进行低温保存，而是需要开展重新移种处理，再进行冷冻保藏[4]。除此之外，在菌种保藏期间，工作人员需要检查菌种的活力情况。一般情况下，保藏周期在1～5 年。对比其他方法，低温冷冻保藏方法的应用具有十分显著的优势，如更长的保藏期限、更简单的操作、更低的成本等，是当前菌种保藏中的一种常用保藏方式[5]。
4.3 冷冻真空干燥保藏方法
冷冻真空干燥保藏方法是菌种保藏中最为安全的方法。一般情况下，标准菌种都会选择应用冷冻真空干燥保藏方法。同时，保存很多活力较强的微生物和孢子时，也可以采用冷冻真空干燥保藏方法。冷冻真空干燥保藏方法，具有时间长、范围广、存活率高的特点。在实践中，工作人员需要在三角瓶中放入卵白、脱脂奶、血清，然后对其进行高压灭菌处理。之后，准备好接种环，选择生长良好的孢子、菌种，在培养基中对其进行悬浮处理，从而形成菌悬液。之后，选择0.2 mL 菌悬液，在经灭菌处理的玻璃安瓿瓶中，对其进行无菌操作分装处理。同时，将安瓿瓶放入-30～-40 ℃的冷冻槽环境中，迅速冷冻。
5.1 定人定点管理
微生物实验室需要建立健全完善的菌种保藏制度和使用制度，在开展菌种管理工作时要安排专门人员，一般需要选择2 人共同保管。同时，将菌种保存于安全环境中。如果需要使用冰箱、铁箱子等容器，则需要对其进行加锁，并采取双人双锁的设置方式。
此外，在面对不同菌种时，工作人员需要完善不同菌种的实验资料，做好不同菌种的详细记录。之后，开展菌种管理，落实菌种的申购、领用、保管、接种传代等方面的标准化程序。其中，工作人员需要严格重视菌种保存、菌种使用、菌种传代、菌种转移、菌种销毁等各项处理工作，并在规定的指导下完成操作。同时，记录具体操作流程，方便后期追溯。
5.2 定期检查
通过组织专业人员开展定期检查工作，能够检查菌种的情况，包括但不限于菌种的存活情况、形态特征、生理生化特征等，保证菌种保存技术的有效性。同时，检测单位需要安排专业工作人员对菌种的外观情况、真空度情况、干燥情况等各项数据，做好定期检查。
综上所述，只有切实保证菌种管理符合标准和要求，才能真正提升检验工作质量，促进我国食品行业的安全发展。
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