罗旋，沈霞，王薇，张东东*（. 咸阳职业技术学院，陕西 咸阳 7000；
. 陕西中医药大学药学院，陕西 咸阳 7046）
连翘（Forsythiae Fructus）为木犀科（Oleaceae）连翘属（Forsythia）植物连翘（Forsythia suspensa）的成熟干燥果实[1]，又称旱连子、大翘子、空翘等[2]，文献报道其主要化学成分为木脂素类、三萜类、黄酮类和苯乙醇苷类等[3-5]。连翘性凉味苦，具有抗炎、抗病毒、抗氧化和抗菌等药理活性[6-7]。目前关于连翘的化学成分研究多集中于其果实和花，而连翘叶的化学成分研究并不系统[8]，为进一步明确连翘叶的化学成分，为其临床科学应用提供科学依据。本文对其乙醇提取物的正丁醇萃取部位进行了系统研究，从中共鉴定了7个化合物（结构见图1），分别为对羟基苯乙基-O-β-D-葡萄糖苷（1）、2-（4-羟基-3-甲氧基苯基）-乙基-O-β-D-葡萄糖苷（2）、（＋）-8-羟基松脂醇-4-O-β-葡萄糖苷（3）、异樱花素-5-O-芸香糖苷（4）、山柰酚（5）、槲皮素（6）和芦丁（7），化合物1～4为首次从连翘叶中分离鉴定。
图1 化合物1～7的结构图Fig 1 Chemical structures of compounds 1～7
Avance400 核磁共振仪（Bruker公司）；
岛津LC-6AD半制备液相色谱仪（SPD-20A检测器，日本岛津公司）；
6550Q-TOF 质谱仪（美国安捷伦公司）；
Ultimate XB-C18色谱柱（10 mm× 250 mm，5 µm，月旭科技上海股份有限公司）；
恒温水浴锅（江苏天翎有限公司）；
Sephadex LH-20（美国GE公司）；
薄层色谱硅胶、柱色谱用硅胶（青岛海洋化工厂）；
色谱甲醇和乙腈（Admas试剂公司）；
甲醇、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯等均为分析纯（天津科密欧化学试剂有限公司）。
连翘叶于2019年9月采自陕西省咸阳市旬邑县，经陕西中医药大学药学院王薇教授鉴定为木犀科Oleaceae连翘属Forsythia植物植物连翘Forsythia suspensa（Thunb）Vahl的干燥叶。标本（编号：20190911LQ）保存于陕西中医药大学中药标本馆。
干燥的连翘叶6.0 kg，粉碎后以80%乙醇回流提取3次，每次2 h。回收乙醇后浓缩至浸膏，加水稀释，分别用乙酸乙酯和水饱和正丁醇萃取3次，得到乙酸乙酯部位88.5 g，正丁醇部位173.1 g。取正丁醇部位170 g，经硅胶柱色谱分离，以二氯甲烷-甲醇梯度洗脱（100∶0、50∶1、30∶1、20∶1、10∶1、7∶1、3∶1、2∶1和1∶1）薄层色谱检测，合并相同流分后，得到A1～A11共11个组分。A4（13.2 g）经葡聚糖凝胶柱色谱分离，甲醇-二氯甲烷（1∶1）洗脱，得到化合物5（31.8 mg）。A5（9.9 g）经葡聚糖凝胶柱色谱分离，甲醇洗脱，得到化合物6（17.6 mg）。A6（19.6 g）经葡聚糖凝胶柱色谱分离，甲醇洗脱，薄层色谱检测合并后，得到A6-1～A6-7共7个组分。A6-4（0.4 g）经半制备高效液相色谱分离，甲醇-水（44∶56）洗脱，流速1.5 ml·min－1，得到化合物1（8.5 mg，tR＝41.4 min）和2（13.2 mg，tR＝36.2 min）；
A6-7（0.4 g）经半制备HPLC分离，甲醇-水（20∶80）洗脱，流速1 mL·min－1，得到化合物3（6.9 mg，tR＝22.6 min）；
A8（15.0 g）经葡聚糖凝胶柱色谱分离，甲醇洗脱，TLC检测合并后，得到A8-1～A8-5共5个组分。A8-4（0.5 g）经半制备液相色谱分离，乙腈-水（18∶82）洗脱，流速2.0 mL·min－1，得到化合物4（7.1 mg，tR＝35.0 min）和化合物7（19.2 mg，tR＝38.4 min）。
化合物1：白色粉末，ESI-MSm/z301 [M＋H]＋，1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：6.74（2H，d，J＝8.6 Hz，H-2，6），7.09（2H，d，J＝8.6 Hz，H-3，5），2.85（2H，t，J＝6.7 Hz，H-7），3.65（2H，m，H-8），4.32（1H，d，J＝7.9 Hz，H-1"），3.17（1H，m，H-2"），3.29（1H，m，H-3"），3.34（1H，m，H-4"），3.41（1H，m，H-5"），3.60（1H，m，H-6"a），3.85（1H，m，H-6"b）；
13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：156.7（C-1），116.1（C-2，6），130.7（C-3，5），131.0（C-4），36.3（C-7），71.6（C-8），104.3（C-1"），75.2（C-2"），77.8（C-3"），72.0（C-4"），77.9（C-5"），62.6（C-6"）。以上数据与文献报道[9]基本一致，故化合物1鉴定为对羟基苯乙基-O-β-D-葡萄糖苷。
化合物2：白色粉末，ESI-MSm/z331 [M＋H]＋，1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：6.67（1H，d，J＝8.4 Hz，H-2），6.64（1H，dd，J＝1.9，8.4 Hz，H-3），6.84（1H，d，J＝1.9 Hz，H-5），2.88（2H，t，J＝6.7 Hz，H-7），3.55（2H，m，H-8），3.66（3H，s，OCH3），4.31（1H，d，J＝7.9 Hz，H-1"），3.16（1H，m，H-2"），3.25（1H，m，H-3"），3.35（1H，m，H-4"），3.43（1H，m，H-5"），3.63（1H，m，H-6"a），3.86（1H，m，H-6"b）；
13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：148.8（C-1），113.7（C-2），116.0（C-3），131.5（C-4），122.5（C-5），145.9（C-6），36.3（C-7），71.7（C-8），104.3（C-1"），75.0（C-2"），78.0（C-3"），71.8（C-4"），77.9（C-5"），62.8（C-6"）。以上数据与文献报道[10]基本一致，故化合物2鉴定为2-（4-羟基-3-甲氧基苯基）-乙基-O-β-D-葡萄糖苷。
化合物3：白色粉末，ESI-MSm/z535 [MH]－，[α]20D＋10.4（c0.1，MeOH）。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.09（1H，d，J＝1.8 Hz，H-2），7.15（1H，d，J＝8.2 Hz，H-5），6.97（1H，dd，J＝1.8，8.2 Hz，H-6），4.71（1H，s，H-7），3.85（1H，d，J＝9.8 Hz，H-9a），4.04（1H，d，J＝9.8 Hz，H-9b），7.04（1H，d，J＝1.8 Hz，H-2"），6.75（1H，d，J＝8.1 Hz，H-5"），6.85（1H，dd，J＝1.8，8.1 Hz，H-6"），4.83（1H，s，H-7"），3.33（1H，m，H-8"），3.76（1H，d，J＝9.8 Hz，H-9"a），4.45（1H，d，J＝9.8 Hz，H-9"b），3.85（3H，s，3-OCH3），3.87（3H，s，3"-OCH3），4.85（1H，d，J＝7.6 Hz，H-1""），3.34～3.70（6H，m，H-2""～H-6""）。13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：132.8（C-1），113.4（C-2），150.4（C-3），148.0（C-4），117.6（C-5），121.3（C-6），88.8（C-7），92.9（C-8），76.0（C-9），133.1（C-1"），111.2（C-2"），149.2（C-3"），147.8（C-4"），116.1（C-5"），120.5（C-6"），87.9（C-7"），62.3（C-8"），72.2（C-9"），56.6（3-OCH3），56.3（3"-OCH3），102.8（C-1""），74.9（C-2""），77.8（C-3""），71.2（C-4""），78.1（C-5""），62.4（C-6""）。以上数据与文献报道[11]基本一致，故化合物3鉴定为（＋）-8-羟基松脂醇-4-O-β-葡萄糖苷。
化合物4：淡黄色粉末，ESI-MSm/z593 [MH]－。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：5.43（1H，dd，J＝3.0，12.0 Hz，H-2），2.76（1H，m，H-3a），3.15（1H，m，H-3b），6.20（1H，d，J＝2.1 Hz，H-6），6.18（1H，d，J＝2.1 Hz，H-8），7.43（2H，d，J＝8.5 Hz，H-2"，6"），6.95（2H，d，J＝8.5 Hz，H-3"，5"），3.79（3H，s，4"-OCH3），4.93（1H，d，J＝7.2 Hz，H-1""），3.29～3.73（6H，m，H-2""～6""），4.65（1H，br s，H-1"""），3.33～3.69（4H，m，H-2""～5""），1.18（3H，d，J＝6.5 Hz，H-6"""）。13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：78.8（C-2），41.7（C-3），196.9（C-4），163.5（C-5），96.5（C-6），165.4（C-7），95.6（C-8），163.0（C-9），103.5（C-10），130.5（C-1"），127.6（C-2"，6"），113.6（C-3"，5"），160.0（C-4"），54.4（4"-OCH3），100.8（C-1""），75.6（C-2""），76.6（C-3""），71.0（C-4""），76.4（C-5""），66.1（C-6""），99.6（C-1"""），70.8（C-2"""），70.6（C-3"""），72.6（C-4"""），68.4（C-5"""），16.4（C-6"""）。以上数据与文献报道[12]基本一致，故化合物4鉴定为异樱花素-5-O-芸香糖苷。
化合物5：黄色粉末，ESI-MSm/z287 [M＋H]＋。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：6.19（1H，d，J＝1.9 Hz，H-6），6.39（1H，d，J＝1.9 Hz，H-8），8.13（2H，d，J＝8.6 Hz，H-2"，H-6"），6.93（2H，d，J＝8.6 Hz，H-3"，H-5"）；
13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：146.6（C-2），135.9（C-3），175.7（C-4），156.8（C-5），97.8（C-6），164.2（C-7），93.3（C-8），161.2（C-9），103.4（C-10），122.3（C-1"），129.5（C-2"），114.8（C-3"），159.3（C-4"），114.9（C-5"），129.5（C-6"）。以上数据与文献报道[13]基本一致，故化合物5鉴定为山柰酚。
化合物6：黄色粉末，ESI-MSm/z301 [MH]－。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：12.49（1H，br s，5-OH），6.19（1H，d，J＝1.9 Hz，H-6），6.40（1H，d，J＝1.9 Hz，H-8），7.67（1H，d，J＝2.0 Hz，H-2"），6.88（1H，d，J＝8.5 Hz，H-5"），7.53（1H，dd，J＝2.0，8.5 Hz，H-6"）；
13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：147.1（C-2），136.0（C-3），176.4（C-4），161.0（C-5），98.7（C-6），164.4（C-7），93.9（C-8），156.4（C-9），103.6（C-10），122.5（C-1"），115.6（C-2"），147.3（C-3"），145.4（C-4"），115.6（C-5"），120.3（C-6"）。以上数据与文献报道[14]基本一致，故化合物6鉴定为槲皮素。
化合物7：黄色粉末，ESI-MS：m/z611 [M＋H]＋。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：12.56（1H，br s，5-OH），6.18（1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），6.35（1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），7.53（2H，d，J＝8.4 Hz，H-2"，6"），6.83（2H，d，J＝8.4 Hz，H-3"，5"），5.31（1H，d，J＝7.2 Hz，H-1""），3.22～3.73（6H，m，H-2""～6""），4.36（1H，br s，H-1"""），3.05～3.68（4H，m，H-2"""～5"""），1.00（3H，d，J＝6.4 Hz，H-6"""）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：177.4（C-4），161.3（C-7），160.2（C-5），157.5（C-9），156.6（C-2），148.5（C-4"），144.9（C-3"），133.3（C-3），121.7（C-1"），121.2（C-6"），117.1（C-5"），116.2（C-2"），100.9（C-10），98.8（C-6），93.7（C-8），100.8（C-1""），74.1（C-2""），76.5（C-3""），70.4（C-4""），75.9（C-5""），67.0（C-6""），100.6（C-1"""），70.0（C-2"""），70.6（C-3"""），71.9（C-4"""），68.3（C-5"""），17.8（C-6"""）。以上数据与文献报道[15]基本一致，故化合物7鉴定为芦丁。
本研究从连翘叶中共分离鉴定了7个化合物，包括2个苯乙醇苷类，1个木脂素类和 4个黄酮类化合物，其中化合物1～4为首次从连翘叶中分离得到，可为连翘叶的临床应用提供参考，关于所得化合物后续药理活性筛选需继续深入研究。
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