孙小鑫，王瑞海，吉星月，苗 青*，刘丽梅*
（1.中国中医科学院中医基础理论研究所，北京 100700；
2.北京中医药大学 东方学院，河北 廊坊 065001）
大蒜为百合科植物大蒜Allium sativumL.的鳞茎[1]，是一种历史悠久的药食两用植物。大蒜冻干粉是将新鲜大蒜经全低温速冻、粉碎、冷冻干燥后得到的产物，是目前大蒜上市药品大蒜肠溶片（作为抗感染药应用于临床）的中间体，其保留了大蒜中蒜氨酸、大蒜多糖、大蒜皂苷、氨基酸、微量元素等成分[2]。蒜氨酸是大蒜冻干粉的主要活性成分，具有抗氧化、抗菌、调节免疫、保护心肌等药理作用[3-6]；
大蒜多糖是大蒜冻干粉中含量最多的一类活性成分，具有调节免疫、抗氧化、保护脑损伤、保肝等药理作用[7-10]；
大蒜皂苷具有抗缺氧、抗动脉粥样硬化、抗菌等药理作用[11-13]。目前，一般将蒜氨酸作为大蒜冻干粉的质量控制指标，未见大蒜冻干粉中大蒜多糖、大蒜皂苷的质量控制方法，但由于大蒜多糖、大蒜皂苷均为大蒜冻干粉中的活性成分，控制二者的质量对稳定大蒜肠溶片的质量有进一步的保证，且能够为拓展药品新的临床适应征奠定基础，因此，有必要建立二者的含量测定方法。在前期的研究中，我们以新疆特丰药业股份有限公司的大蒜冻干粉为研究样品，建立大蒜冻干粉的指纹图谱，并采用HPLC 建立了其中主要活性成分蒜氨酸的含量测定方法[14]。本研究拟通过NIRS 建立大蒜冻干粉中蒜氨酸的定量校正模型，在生产过程中实现大蒜冻干粉中蒜氨酸含量的快速测定；
并通过UV-Vis 建立大蒜冻干粉中大蒜多糖及大蒜皂苷的含量测定方法，以明确大蒜冻干粉的质量特点，对大蒜冻干粉的质量控制标准加以补充、完善。
1 材料
蒜氨酸（批号：AL160615，纯度≥99.0%，新疆埃乐欣药业有限公司）；
葡萄糖对照品（批号：110833-201908，纯度≥99.8%，中国食品药品检定研究院）；
知母皂苷A-Ⅲ （批号：R12S8F43634，纯度≥98.0%，上海源叶生物科技有限公司）；
庚烷磺酸钠（批号：R19S11K125061）、羧甲基羟胺半盐酸盐（批号：Z12A10H85668）均购于上海源叶生物科技有限公司；
磷酸二氢钾（批号：959525-1，北京市红星化工厂）；
乙醇（批号：20201010，天津市光复科技发展有限公司）；
苯酚（批号：202003151，成都艾科达化学试剂有限公司）；
浓硫酸（批号：20200828，国药集团化学试剂有限公司）；
甲醇（批号：20210715，天津市大茂化学试剂厂）；
正丁醇（批号：2021052014，天津市致远化学试剂有限公司）；
大蒜冻干粉（批号分别为DG20190301、DG20190201、DG20190505、DG20190602、DG20190603、DG20190605、DG20190606、DG20190607、DG20190703、DG20190704、DG20190706、DG20190707、DG20190708、DG20190709、DG20190801、DG20190802、DG20190803、DG20190804、DG20190806、DG20190901、DG20190902、DG20190903、DG20191201、DG20191206、DG20200402、DG20200403、DG20200404、DG20200405、DG20200406、DG20200501、DG20200502、DG20200503、DG20200504、DG20200601、DG20200602、DG20200603、DG20200604、DG20200605、DG20200606、DG20200607、DG20200608、DG20200609、DG20200701、DG20200702、DG20200703、DG20200704、DG20200705、DG20200901、DG20200902、DG20200903、DG20200904，新疆特丰药业股份有限公司）。
1.2 仪器
Antaris Ⅱ型傅立叶变换近红外光谱仪（美国Thermo 公司）；
Agilent 1100 型高效液相色谱仪、Agilent 8453 型紫外-可见分光光度计（美国安捷伦科技公司）；
BT25S 型十万分之一电子天平（德国赛多利斯科学仪器有限公司）；
SB-5200DT 型超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；
HW SY11-K 型水浴锅（北京市长风仪器仪表公司）；
ZDHW 型调温电热套（北京中兴伟业仪器有限公司）；
VORTEX GENIUS 3 型漩涡混悬器（德国IKA 公司）。
2.1 蒜氨酸含量测定
2.1.1 大蒜冻干粉近红外光谱数据的采集 取储存于干燥箱内的50 批大蒜冻干粉样品，每批称取约3 g，装入石英样品杯内，等力压平，采用积分球漫反射方式采集50 批大蒜冻干粉的近红外光谱。以空气为参比，扫描范围为12 000 ～ 4 000 cm-1，扫描次数为64 次，分辨率为16 cm-1，每批大蒜冻干粉重复扫描2 次，见图1。
图1 50 批大蒜冻干粉样品的近红外光谱图Fig. 1 Near infrared spectrum of 50 batches of freeze dried garlic powder
2.1.2 50 批大蒜冻干粉中蒜氨酸含量测定 （1）供试品溶液的制备 取大蒜冻干粉约0.1 g，精密称定，精密加入0.006 7 mol/L 的酶抑制剂（羧甲基羟胺半盐酸盐）3 mL，振摇直到粉末完全分散，离心得到澄清溶液，精密吸取0.5 mL 澄清溶液，用酶抑制剂定容至10 mL，摇匀，滤过，取续滤液，即得[14]。
（2）色谱条件 Hypersil BDS C18色谱柱，流动相为甲醇（A）-［0.28%磷酸二氢钾+ 0.2%庚烷磺酸钠溶液（pH = 2.1） ］（B）= 10 ∶90；
流速为0.5 mL/min；
检测波长为210 nm；
进样量为5 μL；
色谱柱温为35 ℃[14]。
（3）含量测定 根据“2.1.2（2）”项下方法制备50 批样品的供试品溶液，按“2.1.2（1）”项下色谱条件进液相分析，记录蒜氨酸的峰面积，计算50 批样品中蒜氨酸的含量，结果见表1。
表1 50 批大蒜冻干粉中蒜氨酸含量测定结果（%，n = 2）Tab. 1 Determination results of alliin in 50 batches of freeze-dried garlic powder（%，n = 2）
2.1.3 蒜氨酸定量校正模型的建立 将大蒜冻干粉中的蒜氨酸含量实测值和近红外光谱数据输入TQ 9.0 定量分析软件进行数据处理，采用漫反射原理进行建模，并采用偏最小二乘法（PLS）建立定量校正模型。确定校正集及验证集，并对不同的光谱预处理方法及波段进行比较，以r、RMSECV、RMSEP 为评价指标。通常，r越接近1，RMSECV 和RMSEP 越小，模型的准确度和预测效果越好[15]。
2.1.4 校正集和验证集的确定 随机选取50 批样品中的35 批样品组成校正集，其余15 批样品作为验证集建立模型，结果见表2。
表2 校正集和验证集中蒜氨酸含量范围（%）Tab. 2 Determination range of alliin in calibration set and validation set （%）
2.1.5 光谱预处理方法的确定 为了提高所建立模型的精度和稳定性，在建立定量校正模型前，需要对原始光谱进行预处理以消除光谱信号中仪器响应、光散射、杂散光、高频噪音等的干扰[15]。本研究对原始光谱以及一阶导数、二阶导数、多元散射校正+二阶导数、标准归一化法+二阶导数这几种预处理方法进行了比较，结果表明，采用一阶导数法处理光谱时，r最接近1，而RMSECV 和RMSEP 值最低，因此选用一阶导数法作为光谱数据预处理方法，见表3。
表3 不同光谱预处理方法对PLS 模型参数的影响Tab. 3 Effects of different spectral pretreatment methods on PLS model parameters
2.1.6 波段的确定 为了避免因建模波段范围太广而导致大量冗余信息的出现，简化运算，保证所建模型的准确性[16]，本研究考察了不同波段的建模效果，在全光谱范围内划分波段，选择RMSECV值低于全光谱的子区间单独或组合进行建模，以RMSEP、RMSECV 以及r为评价标准，结果表明，蒜氨酸在8 809 ～ 4 079 cm-1波段处，r最接近1，RMSEP 最小，RMSECV 虽然不是最小，但和最小值较接近。因此，确定蒜氨酸的建模波数范围为8 809 ～4 079 cm-1，见表4。
表4 不同光谱区间对PLS 模型参数的影响Tab. 4 Effects of different spectral intervals on PLS model parameters
2.1.7 主成分数的选择 主成分数过大或过小都会对PLS 定量校正模型的预测结果的准确性产生影响[17]，本研究采取内部交叉验证方法，考察主成分数对RMSECV 的影响，RMSECV 最小时，最适主成分数为10。
2.1.8 模型的建立与验证 采用以上确定的最优条件，即NIRS 经过一阶导数处理后，在8 809 ～4 079 cm-1波段处，选择前10 个主成分建立最优定量校正模型，见图2。蒜氨酸定量校正模型的r为0.998 7，RMSEC 为0.024 5，RMSECV 为0.104。以验证集15 批样品的NIRS 预测值与HPLC 实测值的比值作为预测回收率，所得蒜氨酸含量的平均回收率为99.72%，见表5。由此可见，所建模型基本能满足快速检测的需求。
图2 蒜氨酸定量校正模型Fig. 2 Quantitative calibration model of alliin
表5 模型对验证集样品的预测结果（%）Tab. 5 Prediction results of validation set samples by the model （%）
2.2 大蒜多糖含量测定
2.2.1 对照品溶液的制备 取无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成1 mL 含有0.077 0 mg 的对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 取大蒜冻干粉约25 mg，精密称定，置圆底烧瓶中，加入50 mL 乙醇回流1 h，放凉过滤，少量乙醇冲洗烧瓶，用同一滤纸过滤，挥干乙醇后，置烧瓶中，加入蒸馏水50 mL，称定重量，回流30 min，放至室温，再称定重量，以水补足失重，过滤，精密吸取续滤液1 mL，置于5 mL 容量瓶中，蒸馏水定容至刻度，摇匀，即得。
2.2.3 检测波长的确定 对对照品溶液和供试品溶液进行全波长扫描，结果表明，葡萄糖的最大吸收波长为485 nm，供试品的最大吸收波长为483 nm，对照品和供试品的最大吸收波长基本一致，符合《中国药典》规定，故选择检测波长为485 nm。
2.2.4 显色及测定方法 本研究按课题组前期建立的大蒜提取物中大蒜多糖的含量测定方法进行溶液的显色及测定[18]。精密吸取对照品溶液及供试品溶液各1 mL 于10 mL 具塞试管中，分别精密加入5%苯酚溶液1 mL，混匀后精密加入浓硫酸5 mL，放置室温10 min，再置于沸水浴加热10 min，取出置于冰水浴中冷却后再放置至室温，采用UV-Vis，以空白试剂为参比在485 nm 处测定吸光度。
2.2.5 方法学考察 （1）线性关系考察 分别精密吸取“2.2.1”项下葡萄糖对照品溶液0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1 mL 置于10 mL 具塞试管中，加蒸馏水至1 mL，摇匀，按“2.2.4”项下方法显色并测定吸光度值。以葡萄糖浓度（X，mg/mL）为横坐标，吸光度值（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。回归方程为Y= 8.116 9X+ 0.002 8，r= 0.999 1。结果表明葡萄糖在0.038 5 ～ 0.077 0 mg/mL 线性关系良好。
（2）精密度试验 精密吸取“2.2.1”项下葡萄糖对照品溶液，按“2.2.4”项下方法显色并连续测定吸光度6 次，求得吸光度值的RSD 值为0.35%（n=6），表明仪器的精密度良好。
（3）重复性试验 取大蒜冻干粉（批号：DG20190301） 6 份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.4”项下方法显色并测定吸光度，求得吸光度值的RSD 为2.16% （n= 6），表明此方法的重复性良好。
（4）稳定性试验 精密吸取“2.2.5（3）”项下的一份样品1 mL，按“2.2.4”项下方法显色，分别于显色后0、20、40、60、120、240、360 min 测定吸光度，求得吸光度的RSD 为1.89%，表明供试品溶液在6 h 内稳定。
（5）加样回收率试验 取无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成1 mL 含有0.668 0 mg 的对照品溶液。取6 个圆底烧瓶，分别精密加入上述葡萄糖对照品溶液各10 mL，挥干溶剂后，精密加入已知含量的大蒜冻干粉（批号：DG20190301）约12.5 mg，按“2.2.2”项方法制备供试品溶液，按“2.2.4”项下方法显色并测定吸光度，计算加样回收率及RSD，结果表明大蒜多糖的加样回收率在95.04% ～ 99.20%之间，RSD 为1.71%，说明该方法准确性良好，结果见表6。
表6 大蒜多糖的加样回收率试验结果（n = 6）Tab. 6 Results of recovery rate of garlic polysaccharides（n = 6）
2.2.6 大蒜精多糖的制备 称取大蒜冻干粉（批号：DG20190301）10.00 g，加入150 mL 蒸馏水回流1 h，过滤，得溶液1，药渣加150 mL 蒸馏水回流1 h，过滤，得溶液2，合并溶液1、2，浓缩，加乙醇使含醇量为85%，放置冰箱过夜，离心，得沉淀，挥干乙醇后减压干燥，得大蒜总多糖提取物。称取该提取物5.00 g，80%乙醇索氏回流提取8 h，药渣挥干溶剂后，置于烧瓶中，加蒸馏水200 mL，回流提取1 h，过滤，滤液浓缩后，加乙醇使含醇量为80%，搅匀，放置冰箱过夜，离心，沉淀减压干燥，得粗多糖[19]。取粗多糖配制成含量为3%的溶液，用Sevage 法脱蛋白[20]，H2O2脱色[21]，加入乙醇使含醇量为80%，搅匀，放置冰箱过夜，抽滤得下层多糖。以无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤多糖，将洗涤后的多糖减压干燥，得白色的大蒜精多糖。
2.2.7 换算系数的测定 取大蒜精多糖适量，精密称定，加纯净水制成每1 mL 含0.080 0 mg 的大蒜精多糖溶液，即得。精密吸取葡萄糖对照品溶液和大蒜精多糖溶液1 mL，按“2.2.4”项下方法显色并测定吸光度。按以下公式计算葡萄糖对照品与大蒜精制多糖之间的换算系数：f =W/C[22]。式中，W表示大蒜精多糖溶液的浓度（mg/mL），C为大蒜精多糖溶液中葡萄糖的浓度（mg/mL）。计算得换算系数为1.35（n= 6）。
2.2.8 样品测定结果 按“2.2.2”项下方法制备15 批样品的供试品溶液，按“2.2.4”项下方法显色并测定吸光度，根据“2.2.5（1）”项下标准曲线及“2.2.7”项下换算系数计算15 批样品中大蒜多糖的含量，其平均含量为70.42%，结果见表7。
表7 15 批大蒜冻干粉中大蒜多糖含量测定结果（%，n = 2）Tab. 7 Determination results of garlic polysaccharides in 15 batches of freeze-dried garlic powder （%，n = 2）
2.3 大蒜皂苷含量测定
2.3.1 对照品溶液的制备 取知母皂苷A- Ⅲ对照品适量，精密称定，置棕色容量瓶中，加甲醇制成每1 mL 含0.541 0 mg 的对照品储备液，即得。
2.3.2 供试品溶液的制备 取大蒜冻干粉约0.2 g，精密称定，置于圆底烧瓶中，精密加入甲醇40 mL，称定重量，回流1 h，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足失重，过滤，精密吸取滤液20 mL 置蒸发皿中，90 ℃水浴蒸干溶剂，残渣用10 mL 水溶解，加入水饱和正丁醇萃取4 次（每次10 mL），将收集到的正丁醇90 ℃水浴蒸干，残渣用甲醇溶解，过滤至5 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度。
2.3.3 检测波长的确定 对“2.3.1”项下对照品溶液和“2.3.2”项下供试品溶液进行全波长扫描，结果表明，对照品溶液与供试品溶液的最大吸收波长均为325 nm，故确定检测波长为325 nm。
2.3.4 显色及测定方法 本研究按课题组前期建立的大蒜提取物中大蒜皂苷的含量测定方法进行溶液的显色及测定[23]。精密吸取对照品溶液和供试品溶液各0.15 mL，分别置于具塞试管中，溶液80 ℃水浴挥干后，精密加入70%硫酸-甲醇5 mL，涡旋混匀，置于60 ℃水浴中加热60 min，取出置于冰水浴中冷却后，再取出放置至室温，采用UV-Vis，以相应溶液为空白，在325 nm 处测定吸光度。
2.3.5 方法学考察 （1）线性关系考察 精密吸取“2.3.1”项下对照品储备液，用甲醇将此对照品储备液依次稀释，配制成浓度分别为0.487 0 mg/mL、0.433 0 mg/mL、0.379 0 mg/mL、0.325 0 mg/mL、0.271 0 mg/mL 的对照品溶液。精密吸取对照品储备液和稀释后的系列对照品溶液各0.15 mL，按“2.3.4”项下方法显色并测定吸光度值。以知母皂苷A-Ⅲ 浓度（X，mg/mL）为横坐标，吸光度值（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。回归方程为Y=1.178X+ 0.002，r= 0.999 5。表明知母皂苷A- Ⅲ在0.271 0 ～ 0.541 0 mg/mL 线性关系良好。
（2）精密度试验 精密吸取“2.3.5（1）”项下浓度为0.379 0 mg/mL 的知母皂苷A- Ⅲ的对照品溶液，按“2.3.4”项下方法显色并连续测定吸光度6 次，求得吸光度值的RSD 值为0.07%（n= 6），表明仪器的精密度良好。
（3）重复性试验 取大蒜冻干粉（批号：DG20190301）6 份，按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.3.4”项下方法显色并测定吸光度，求得吸光度值的RSD 为0.70%（n= 6），表明此方法的重复性良好。
（4）稳定性试验 精密吸取“2.3.2”项下供试品溶液0.15 mL，按“2.3.4”项下方法显色，分别于显色后0、20、40、60、80、100、120 min 测定吸光度，求得吸光度的RSD 为2.26%，表明供试品溶液在2 h 内稳定。
（5）加样回收率试验 取已知含量的大蒜冻干粉（批号：DG20190301）约0.1 g，6 份，精密称定，分别精密加入知母皂苷A- Ⅲ对照品溶液（浓度为1.015 0 mg/mL）2 mL，并分别加入甲醇38 mL，按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.3.4”项下方法显色并测定吸光度，计算加样回收率及RSD，结果表明大蒜皂苷的加样回收率在96.36% ～ 102.94%之间，RSD 为2.21%，说明此方法准确性良好，结果见表8。
表8 大蒜皂苷的加样回收率试验结果（n = 6）Tab. 8 Results of recovery rate of garlic saponins（n = 6）
2.3.6 样品测定结果 按“2.3.2”项下方法制备15 批样品的供试品溶液，按“2.3.4”项下方法显色并测定吸光度，根据“2.3.5（1）”得到的标准曲线计算15 批样品中大蒜皂苷的含量，结果见表9，最终得到平均含量为1.96%。
表9 15 批大蒜冻干粉中大蒜皂苷含量测定结果（%，n = 2）Tab. 9 Determination results of garlic saponins in 15 batches of freezedried garlic powder （%，n = 2）
在前期的研究中，采用HPLC 建立了大蒜冻干粉中蒜氨酸的含量测定方法[14]。由于蒜氨酸能够在蒜氨酸酶的催化下转化为大蒜辣素，大蒜辣素不稳定，可进一步分解生成大蒜素等含硫小分子化合物，故为了避免蒜氨酸被酶解，对灭活蒜氨酸酶的方法（微波灭酶、甲醇灭酶、乙醇灭酶、酶抑制剂灭酶）与参数（时间、剂量等）进行了系统考察，最终确定灭酶方式为酶抑制剂灭酶，且加入样品量2.18%的酶抑制剂可以达到彻底灭酶的效果。因此，在建立蒜氨酸的定量校正模型之前，采用HPLC 测得的蒜氨酸的含量能够准确地反映大蒜冻干粉的质量。本研究采用NIRS 建立了大蒜冻干粉中蒜氨酸的定量校正模型。与HPLC相比，此方法分析时间短，一旦建立了模型，只需采集样品的光谱数据，输入所建分析模型即可快速检测出大蒜冻干粉中的蒜氨酸含量，在几分钟内便可完成整个分析过程，而且此方法不消耗化学试剂，不破坏分析样品，不产生任何污染，具有快速、无损、绿色、简便等特点。此外，此方法既可在实验室进行分析，也可在中间体的生产现场检测蒜氨酸的含量，便于动态掌握大蒜冻干粉的质量。因此，此方法适用于多批次大蒜冻干粉中蒜氨酸含量的快速测定。据文献报道，验证集样品的预测值与实测值的相关系数r＞0.95且相对偏差小于±5%时才算真正建立好模型[24]。本研究预测结果显示，蒜氨酸含量预测值与实测值之间的相关系数为0.977 3，且预测值与实测值的相对偏差均小于±5%，因此，本研究所建立的模型较为可靠。但是，要使建立的模型更加可靠，需要足够多的样品批数，文献报道测定样品数至少应为30 批次[25]，本研究采用50 批样品，符合要求，但数量相对较少，未来可以不断地增加样品批数，不断提高模型的准确性和适用性。
本研究以吸光度/质量（质量是指实际参加显色反应的溶液中大蒜多糖的质量）为考核指标，对大蒜多糖供试品溶液的前处理方法进行了筛选。结果显示，不同提取方法回流和超声的吸光度/质量值分别为4.341 0 和3.861 9，回流提取优于超声提取；
不同提取时间20、30、60 min 的吸光度/质量值分别为4.283 7、4.369 3、3.930 0，提取时间为30 min时吸光度/质量值最高；
不同加水量25、50、100 mL的吸光度/质量值分别为3.979 4、4.272 6、4.088 3，加水量为50 mL 时吸光度/质量值最高。最终确定供试品溶液制备方法为：取大蒜冻干粉约25 mg，乙醇回流除杂后，加水50 mL，回流提取30 min。大蒜多糖由多种单糖组成，仅以某一单糖作标准曲线计算得到的多糖含量的结果与多糖的实际含量存在较大误差[18]，本研究以葡萄糖为对照品，对葡萄糖与大蒜精制多糖之间的换算系数进行了测定，采用换算系数校正后的多糖含量更接近总多糖含量的实际值[26]。
本研究以吸光度/质量（质量是指实际参加显色反应的溶液中大蒜皂苷的质量）为考核指标，对大蒜皂苷供试品溶液的前处理方法进行了筛选。结果显示，不同提取方法回流和超声的吸光度/质量值分别为0.151 5 和0.126 1，回流提取优于超声提取；
不同提取溶剂60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、甲醇的吸光度/质量值分别为0.132 0、0.145 2、0.142 2、0.151 8，甲醇为提取溶剂时吸光度/质量值最高；
不同提取溶剂量20、40、60 mL 的吸光度/质量值分别为0.148 3、0.164 1、0.132 9，提取溶剂量为40 mL 时吸光度/质量值最高；
不同提取时间0.5、1、1.5 h 的吸光度/质量值分别为0.129 0、0.160 3、0.155 4，提取时间为1 h时吸光度/质量值最高；
不同萃取次数3 次、4 次、5次的吸光度/质量值分别为0.131 3、0.161 8、0.161 9，萃取4 次、5 次时，样品吸光度/质量值基本一致，故确定萃取次数为4 次。最终确定供试品溶液制备方法为：取大蒜冻干粉约0.2 g，加甲醇40 mL，回流1 h，加水饱和正丁醇萃取4 次。目前，大蒜皂苷含量测定选取的对照品包括薯蓣皂苷元、知母皂苷A- Ⅲ及在大蒜中提取的大蒜皂苷单体Proto-iso-eruboside-B（PIEB）[23]，其中，PIEB 应作为对照品的首选，但PIEB 在大蒜中含量较低，分离纯化步骤多，制备周期长、得率低，目前只有个别实验室制备的报道，无PIEB 对照品。薯蓣皂苷元和知母皂苷A-Ⅲ 均与大蒜皂苷苷元具有相似的结构，且均可以购买，课题组前期研究认为，知母皂苷A- Ⅲ比薯蓣皂苷元更适合作为大蒜皂苷含量测定的对照品[27]，所以，本研究选用知母皂苷A- Ⅲ作为对照品。
本研究采用NIRS 建立了大蒜冻干粉中蒜氨酸的定量校正模型，为蒜氨酸含量的快速测定奠定了基础。采用UV-Vis 建立了大蒜多糖、大蒜皂苷的含量测定方法，补充了大蒜冻干粉的质量控制标准，且能够在质量控制方面为生产企业探索大蒜多糖、大蒜皂苷的生理活性，拓展药品新的临床适应征奠定基础。
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