梁超
摘要：目的 建立注射用泮托拉唑钠中EDTA-2Na的含量测定方法。方法 HPLC法，色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶（Intersil ODS-3，4.6mm×150mm，3μm），以缓冲液（10%四丁基氢氧化铵溶液20ml，加水180ml，以三氟乙酸调节pH值至3.5）-乙腈-水（10：22：68）为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为254nm，柱温为30℃。结果 线性回归方程为Y=10098.3985X-704.3415（r=0.9998），EDTA-2Na浓度在3.95～39.40μg/ml范围内线性关系良好;平均回收率为99.60%（n=9），RSD为0.5%，样品在24h内基本稳定。
结论 本方法快速、准确、灵敏度高、重复性好，可用于测定注射用泮托拉唑钠中EDTA-2Na的含量。
关键词：泮托拉唑钠;EDTA-2Na;HPLC法;含量
【中图分类号】 R927.2 【文献标识码】 A 【文章编号】2107-2306（2022）13--01
注射用泮托拉唑钠主要用于十二指肠溃疡、胃溃疡、急性胃粘膜病变、复合型胃溃疡等所致的急性上消化道出血[1-2]，为质子泵抑制剂，是一种良好的抑制胃酸药物，临床使用广泛。EDTA-2Na是常用的金属离子络合剂，许可用于注射制剂。它能有效增强药物的稳定性，其原理为EDTA-2Na可以与金属离子形成稳定的水溶性螯合物，能够防止自身的氧化，有利于提高药物在制备、存储和临床配制过程中的稳定性。因此需要在处方中加入EDTA-2Na提高产品的稳定性。中国药典2020年版及进口注册标准JX20150094均收录了注射用泮托拉唑钠的质量标准，但标准中均未收录EDTA-2Na检测方法，为了更好地控制产品质量，本研究开发了一种简单、迅速、精确的用于测定注射用泮托拉唑钠中的EDTA-2Na含量测定方法。
1 仪器与试药
1.1 仪器 HPLC高效液相色谱仪（LC-20AT，岛津）、电子天平（梅特勒）、PB-10型酸度计（梅特勒）。
1.2 试药 硫酸铜（CuSO4·5H2O，分析纯）、10%四丁基氢氧化铵（分析纯）、三氟乙酸（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、EDTA-2Na对照品（纯度100%）、注射用泮托拉唑钠（武田制药，批号：442145）、纯化水自制。
2 溶液的配制
2.1 溶剂：称取硫酸铜250mg，加入水1000ml，搅拌使溶解，即得。
2.2 供试品溶液：取本品1瓶，全部取出称重为45.3mg（含EDTA-2Na约1.0mg），将粉末全部加入到50ml容量瓶中，加入溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3 对照品贮备液：取EDTA-2Na对照品约20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.4 对照品溶液：精密量取对照品贮备液5ml，置50ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
2.5 系统适用性溶液：取泮托拉唑钠约40mg，精密称定，置50ml量瓶中，加对照品贮备液5ml，用溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取滤液。
3 方法与结果
3.1 色谱条件 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶（Intersil ODS-3，4.6mm×150mm，3μm），流动相为缓冲液（10%四丁基氢氧化铵溶液20ml，加水180ml，以三氟乙酸调节pH值至3.5）-乙腈-水（10：22：68），流速为1.0ml/min，检测波长为254nm，柱温为30℃。
3.2 系统适用性试验 分别取“空白溶剂”、“系统适用性溶液”和“对照品溶液”各20μl，注入高效液相色谱仪，采用“3.1”项下色谱条件进样检测，记录色谱图，由色谱图可知EDTA-2Na的保留时间约为15min，系统适用性溶液中EDTA-2Na色谱峰与泮托拉唑色谱峰之间的分离度大于1.5;对照品溶液，连续进样5次，保留时间RSD值小于1.0%，峰面积的RSD值小于5.0%，系统适用性符合要求。
3.3 线性关系考察 称取EDTA-2Na对照品大约20mg，精密称定置200ml容量瓶中，加入溶剂溶解并定容，分别精密移取EDTA-2Na对照品贮备液4ml、10ml、20ml、30ml、40ml分别加入到100ml容量瓶中，再分别加入溶剂稀释至刻度，摇匀，即得各线性对照品溶液，含EDTA-2Na质量浓度分别为4.0μg/ml、10.0μg/ml、20.0μg/ml、30.0μg/ml、40.0μg/ml，采用“3.1”项下色谱条件进样检测，以峰面积（Y）对浓度（X）为进行线性回归，得到标准曲线方程Y=10098.3985X-704.3415（r=0.9998），说明EDTA-2Na浓度在3.95～39.40μg/ml范围内线性关系良好。
3.4 精密度试验 取对照品溶液，分别连续进样6次，记录色谱图，EDTA-2Na的峰面积RSD为0.3%，结果表明此方法精密度良好。
3.5 定量限及检测限 取EDTA-2Na对照品贮备液用溶剂逐级稀释，制备定量限及检测限溶液，同法测定，定量限为0.62ng，S/N约为10，检测限为0.16ng， S/N约为3。
3.6 重复性试验 取本品1瓶，全部取出称重为45.3mg（含EDTA-2Na约1.0mg），将粉末全部加入到50ml容量瓶中，加入溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液进样测定，制备6份供试品溶液中，EDTA-2Na含量均在90.0%～110.0%之间，RSD值为1.1%，小于5.0%，表明此方法重复性良好。
3.7 準确度试验 供试品溶液中EDTA-2Na浓度为20µg/ml，考察浓度分别15µg/ml、20µg/ml、25µg/ml。在3个浓度上考察EDTA-2Na的回收率，分别为供试品溶液中EDTA-2Na浓度的75%、100%、125%，每个浓度上平行制备3份样品溶液。以外标法计算EDTA-2Na的含量。9个样品的回收率在95.0%～105.0%范围内，平均回收率为99.6%，RSD值为0.5%，小于5.0%，表明该方法准确性良好。
3.8 稳定性试验 取供试品溶液，分别在0h、2h、4h、12h和24h进样测定，EDTA-2Na主峰峰面积相对于0h的比值在95.0%～105.0%之间，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。
3.9 样品含量测定 取注射用泮托拉唑钠样品3瓶，每瓶全部取出称重为 45.3mg（含EDTA-2Na约1.0mg），将粉末全部加入到50ml容量瓶中，加入溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液按3.1项色谱条件进样测定;同时取对照溶液进样测定，按照外标法计算每瓶中EDTA-2Na的含量。3瓶注射用泮托拉唑钠粉末中EDTA-2Na含量分别为0.996mg、0.989mg、0.991mg。
4 讨论
4.1 测定方法选择 EDTA-2Na现有的检测方法包括滴定法和比色法，该方法的灵敏度和专属性较差，产生较大干扰;有报道采用HPLC 法测EDTA-2Na的方法，但该方法经验证后峰形较差，检测的准确性和重现性较差[3]。本研究以缓冲液（10%四丁基氢氧化铵溶液20ml，加水180ml，以三氟乙酸调节pH值至3.5）-乙腈-水（10：22：68）作为流动相时，EDTA-2Na出峰时间适宜，峰形较好，基线平稳，检测结果准确可靠，专属性强，检测时间较短，灵敏度较高，检测限低，干扰较少的高效液相色谱法。
4.2 色谱柱的选择 本次实验采用缓冲盐-乙腈-水（10：22：68）為流动相，若使用常规 C18柱，长时间用纯水相冲洗可能会导致固定相的流失，柱效下降，故试验中采用了更强的疏水性相互作用的Intersil ODS-3-Cl8色谱柱，实验结果证明，多次进样后，色谱峰形保持良好。
本方法可用于测定注射用泮托拉唑钠中的EDTA-2Na含量，快速、简便、灵敏度高。因此可利用此法判断该药物辅料中EDTA-2Na的存在，判断是否与参比制剂一致辅料用量，确保仿制产品质量一致性。
参考文献：
[1]陈江飞，苗彩云，杨洪明.国产和进口泮托拉唑钠在输液中的配伍稳定性考察[J].中国临床药学杂志，2013，22（1）：27-30.
[2]刘青青，陈瑶，肖雨婷.泮托拉唑钠粉针剂治疗上消化道出血疗效观察[J].中国实用医药，2013，8（1）：25-26.
[3]赵杰，HPLC法测定注射用泮托拉唑钠中EDTA-2Na的含量[J].医学信息，2013，31（11）：138-139.
猜你喜欢托拉容量瓶注射用泮托拉唑与生长抑素联用于重症急性胰腺炎患者当中的治疗有效性及不良反应探讨中国药学药品知识仓库(2022年10期)2022-05-29注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠不良反应报告分析及使用注意事项探讨中国药学药品知识仓库(2022年7期)2022-05-10泮托拉唑和血凝酶应用于上消化道出血治疗及对止血时间影响分析医学概论(2022年3期)2022-04-24阿拉丁的神灯发明与创新·中学生(2021年10期)2021-10-21骨质疏松症采用阿仑膦酸钠联合注射用骨肽治疗的效果医学前沿(2021年18期)2021-04-14谈如何降低容量瓶的容量误差中国应急管理科学(2021年4期)2021-04-13对容量瓶几个实验问题的探讨中学化学(2019年4期)2019-08-06高中化学实验探究教学设计实践考试周刊(2018年68期)2018-09-17丙二醇（供注射用）细菌内毒素检查方法学研究智富时代(2018年6期)2018-08-06丙二醇（供注射用）细菌内毒素检查方法学研究智富时代(2018年6期)2018-08-06