李晓萍
（泉州市中医院检验科，福建 泉州 362005）
沙眼衣原体、解脲脲原体是人类性传播疾病的常见病原体。近年来，其感染率有逐步上升趋势，造成了广泛的泌尿生殖道感染。对于女性群体而言，感染沙眼衣原体、解脲脲原体不仅可引发非细菌性阴道炎、宫颈炎疾病，严重情况下还会导致女性不孕不育、先兆流产或自然流产等，严重影响女性的健康水平[1]。现阶段，沙眼衣原体、解脲脲原体所致的性疾病发病人群不断增加，发病地区不断扩大，疾病危害日益严重，已成为十分突出的公共卫生安全问题[2]。尤其是在城镇化进程不断加速的背景下，各地区流动人口较多，沙眼衣原体、解脲脲原体感染的风险也随之增加[3]。为了更好了解本地区女性人群中沙眼衣原体、解脲脲原体的感染情况，我院泌尿生殖道感染门诊2019年5月至2020年5月采用实时荧光定量PCR检测2 699例分泌物标本的沙眼衣原体DNA，检测2 134例分泌物标本的解脲脲原体DNA，现对检测结果进行回顾分析，以期为本地区女性生殖道感染疾病的临床诊治提供实验室依据，报道如下。
1.1 一般资料 纳入2019年5月至2020年5月我院泌尿生殖道感染门诊女性生殖道分泌物标本作为研究对象，其中2 699例分泌物标本以实时荧光定量PCR检测沙眼衣原体DNA，2 134例分泌物标本以实时荧光定量PCR检测解脲脲原体DNA，年龄分布11～60岁，平均年龄（35.78±11.05）岁。所有患者知情同意并签署知情同意书，本研究已获得我院伦理委员会的批准。
1.2 检验仪器与试剂 ①检验仪器：AFD9600实时荧光定量PCR仪，Min 1424高速离心机，TZL32干式恒温器，MIX-2500迷你混合仪，冰箱，BIO-DL可调移液器。②检验试剂：沙眼衣原体荧光定量检测试剂盒（达安基因），解脲脲原体荧光定量检测试剂盒（达安基因）。③检验耗材：无菌棉拭子，无菌生理盐水，一次性无菌手套，Tip头，1.5 mL Eppendorf管。
1.3 方法 ①标本采集与处理：采用实时荧光定量PCR检测分泌物标本沙眼衣原体DNA、解脲脲原体DNA。以无菌棉拭子常规采集女性生殖道分泌物，将采集到的分泌物标本加入生理盐水1 mL后震荡混匀，置于1.5 mL离心管中。以离心机离心，12 000 r/min离心5 min。弃上清，沉淀加入1 mL生理盐水混匀，12 000 r/min离心5 min，再重复洗涤1次。去上清，沉淀中加入50 uL DNA提取液充分混匀，将其100 ℃恒温处理，时间为10 min；
而后再次进行离心，12 000 r/min离心2 min，备用。②PCR扩增方法：严格按照沙眼衣原体荧光定量检测试剂盒、解脲脲原体荧光定量检测试剂盒进行操作，取若干PCR反应管，分别加入处理后的样品上清液2 μL，离心数秒，具体参数为8 000 r/min，而后置入AFD9600扩增仪样品槽。具体循环条件如下：93 ℃，2 min；
93 ℃，45 s；
55 ℃，120 s；
10个循环。93 ℃，45 s；
55 ℃，120 s；
30个循环。③检验结果判读：阳性为增长曲线呈S形，Ct值低于27为阳性；
阴性为增长曲线不呈S形，Ct值超过30提示标本DNA含量低于检测下线；
试验灰度区为Ct值在27～30之间表示为试验灰度区，出现此类情况后重复进行1次试验，按照前2项标准进行判断。
1.4 统计学方法 采用描述性方法对数据进行分析。计量资料采用（）表示，组间比较行t检验；
计数资料采用[n（%）]表示，组间比较行χ2检验；
P＜0.05表示差异有统计学意义。
2.1 女性生殖道沙眼衣原体、解脲脲原体阳性率分析 2019年5月至2020年5月我院女性生殖道沙眼衣原体共检测2 699例，女性生殖道解脲脲原体检测共2 134例。见表1。
表1 女性生殖道沙眼衣原体、解脲脲原体阳性率情况
2.2 女性生殖道沙眼衣原体、解脲脲原体感染者年龄分布 186例女性生殖道沙眼衣原体感染者中病例数排名前3位的年龄段分别为21～30岁（85例）、31～40岁（82例）、41～50岁（14例）。见表2。917例女性生殖道解脲脲原体感染者中病例数排名前3位的年龄段分别为31～40岁（417例）、21～30岁（238例）、41～50岁（187例）；
见表3。
表2 186例女性生殖道沙眼衣原体感染者年龄分布情况
表3 917例女性生殖道解脲脲原体感染者年龄分布情况
3.1 生殖道沙眼衣原体感染分析 沙眼衣原体感染与多种疾病存在关联，近年来因生殖道沙眼衣原体感染的性传播疾病呈逐步增加态势而被广泛关注。生殖道沙眼衣原体感染人群十分广泛，疾病类型呈现多样性和复杂性，不仅可以导致多种并发症，还会产生较为严重的后遗症[4]。在生物学特性方面，沙眼衣原体在细胞内发育时候具有特征性的发育周期，其中小而致密的原体存在于细胞之外，有着较强的感染性，大而疏松的网状体无感染性；
但当小而致密的原体感染宿主细胞后可在其中形成包涵体并进一步转化为网状体，进而利用宿主细胞营养不断繁殖直至成熟后从包涵体中释放出来，随着被感染细胞的死亡和破裂而溢出细胞，进一步感染其他细胞[5-6]。沙眼衣原体是衣原体属中与人类关系最为密切的种株之一，可从泌尿道感染并进一步侵袭生殖道上皮，故在泌尿生殖道感染门诊中，沙眼衣原体DNA检测是较为常见的检验项目之一。
在流行病学方面，泌尿生殖道感染是沙眼衣原体感染的主要类型，感染沙眼衣原体除了引发泌尿生殖道疾病外，还可以诱发Reiter综合征、反应性关节炎等较为严重的并发症，且泌尿生殖道沙眼衣原体感染还大大增加了人类免疫缺陷病毒的感染风险，也是女性群体宫颈癌发生率增加的重要危险因素之一[7]。沙眼衣原体感染多发于性活动活跃的人群之中，近年来逐年呈现年轻化趋势，因生殖道沙眼衣原体感染所导致的疾病频发给社会经济带来了严重负担[8]。国外临床研究表明，女性生殖道沙眼衣原体感染多见于性活跃女性群体，且年龄＜25岁、低收入水平、不使用安全套者生殖道沙眼衣原体感染率较高[9]。在进入21世纪以来，我国因沙眼衣原体感染导致的泌尿生殖道疾病也呈现上升趋势，严重影响公共健康。现阶段我国泌尿生殖道沙眼衣原体感染已位居性传播疾病的第3位，成为危害国民公共健康的一大隐患。国内临床研究结果显示，女性生殖道沙眼衣原体感染的易感年龄在22～44岁，导致女性生殖道沙眼衣原体感染的主要危险因素为受教育水平、收入水平、性生活是否采取保护措施、是否有配偶或固定性伴侣等[10-12]。但这一研究结果并不能准确反映女性生殖道沙眼衣原体感染的实际情况，很多生殖道沙眼衣原体感染的女性群体因无明显临床症状不会主动到医院就医或筛查，故很大一部分感染者无法纳入统计。
3.2 生殖道解脲脲原体感染分析 解脲脲原体也被称为溶脲脲原体。20世纪50年代首次在非淋菌性尿道炎患者尿道中分离出解脲脲原体。解脲脲原体的体积很小，无细胞壁，介于细菌与病毒之间，是现阶段无生命培养基中能够生长繁殖的最小微生物，且具有较强的温度改变能力与抵御干燥环境的能力。临床普遍认为，解脲脲原体是非淋病性泌尿生殖系统炎症的主要病原体，女性生殖道解脲脲原体感染后可引发多种疾病，如非淋病性尿道炎、非特异性尿道炎、生殖道感染等。对于妊娠期间的女性而言，生殖道解脲脲原体感染还会引发胎膜早破、早产儿呼吸窘迫综合征等围生期疾病[13-14]。近年来，生殖系统感染性疾病发病率逐年递增，国内外学者对于生殖道解脲脲原体感染的具体致病机制目前尚未明确。目前得到广泛认可的观点主要有2种：一种是认为解脲脲原体有着多种酶活性，可引起细胞间质的坏死和纤毛损伤，进而产生大量的分泌物，临床上表现为尿频、尿急、尿痛、白带增多等，一些患者尿液中甚至可以发现大量黏膜上皮细胞脱落[15]；
另一种观点则更加倾向于免疫损伤，解脲脲原体吸附在宿主细胞上之后，会与宿主细胞膜产生一定的作用，并开始争夺宿主细胞的营养进而导致宿主细胞染色体异常，影响宿主细胞蛋白质与DNA的合成，在这一过程中解脲脲原体代谢所产生的产物还会引起宿主细胞损伤、病变甚至是死亡。尽管目前在大量正常健康人群泌尿生殖道中也会有解脲脲原体较高检出率的相关报道，但更多学者还是倾向于解脲脲原体具有一定的致病性，但这些说法还有待进一步证实[16]。不同地区、不同人群、不同年龄生殖道解脲脲原体感染情况仍然不是很明确，因此基于解脲脲原体DNA检验研究女性生殖道解脲脲原体感染具有重要的临床指导意义。
3.3 生殖道沙眼衣原体、解脲脲原体的检验 沙眼衣原体、解脲脲原体感染泌尿生殖道后感染者多无显著临床症状或呈现出亚临床症状，缺乏较为特异性的临床表现，导致很多感染者无法及时就医。感染者能够保持携带病原体状态较长时间，并成为生殖道沙眼衣原体、解脲脲原体感染的潜在传染源[17]。如感染者免疫力下降或病原体感染时间较长会引发炎症状态，并出现严重的晚期并发症。故早期、及时的筛查生殖道沙眼衣原体、解脲脲原体感染情况对于泌尿生殖道疾病防治具有重要意义。现阶段生殖道沙眼衣原体、解脲脲原体检验的方法主要有细胞培养法、直接涂片法、免疫学方法、分子生物学方法等。其中细胞培养法的技术较为成熟，但耗材价格较高、培养周期较长、灵敏度较低，并且在培养过程中可能存在其他细菌、真菌等微生物的污染，因影响因素众多且对环境与操作技术等要求较高，不适用于生殖道沙眼衣原体的大规模筛查，故限制了这一方法的临床应用。直接涂片法具有费用低廉、操作简便等优势，但阳性率较低，不适用于生殖道沙眼衣原体、解脲脲原体的检查[18]。胶体金法在生殖道沙眼衣原体、解脲脲原体检验中应用较多，具有廉价、简便快捷等优势，但灵敏度较低，不适用于非典型生殖道沙眼衣原体、解脲脲原体的检验。直接荧光抗体法也可以用于生殖道沙眼衣原体、解脲脲原体的检验，但荧光法需要较为昂贵的荧光显微镜设备且对检验人员的操作标准与技术要求较高，不适用于大批量标本的筛查，对于低危人群、无症状人群的筛查价值有限[19]。PCR检测具有检验周期短、操作简便、灵敏度高等优势，在女性生殖道沙眼衣原体、解脲脲原体检验中，可采用尿液标本、宫颈拭子、阴道拭子、尿道拭子等多种样本，且PCR试剂盒检测基因位点能够满足大量目标人群的快速检测，随着PCR操作技术的不断发展和日趋成熟，进行PCR检验可有效避免污染因素并能广泛开展，适用于普通人群及重点人群的生殖道沙眼衣原体、解脲脲原体感染筛查[20]。
本组研究中采用实时荧光定量PCR检测2 699例分泌物标本的沙眼衣原体DNA，检测2 134例分泌物标本的解脲脲原体DNA。其中沙眼衣原体阳性186例，阳性率为6.89%；
解脲脲原体阳性917例，阳性率为42.97%。上述研究结果提示，解脲脲原体的阳性检出率更高，表明其可能是女性生殖道感染防治的重要病原体，因解脲脲原体为女性生殖道正常居住的微生物，与其他微生物共生，在感染后感染者可能无明显临床症状，机体免疫力下降时或出现黏膜受损时解脲脲原体可大量繁殖而致病。在年龄分布方面，本研究中女性生殖道沙眼衣原体感染者中病例数排名前3位的年龄段分别为21～30岁、31～40岁、41～50岁；
女性生殖道解脲脲原体感染者中病例数排名前3位的年龄段分别为31～40岁、21～30岁、41～50岁。由此提示，21～50岁是女性生殖道沙眼衣原体、解脲脲原体感染的高发群体，针对这一年龄范围的女性人群应加强性健康知识教育，并重视易感人群的早期筛查检验。
综上所述，鉴于生殖道沙眼衣原体、解脲脲原体感染的隐匿性与危害性，临床迫切需要将生殖道沙眼衣原体、解脲脲原体检查作为一项常规检验项目更多应用于就医人群及体检人群，以减少沙眼衣原体、解脲脲原体感染所带来的危害。因目前女性生殖道沙眼支原体、解脲脲原体的临床筛查工作有待健全，针对的人群范围较为有限，未来应增加临床检验筛查的覆盖面积，针对重点人群、高危人群重点筛查，以实现生殖道沙眼衣原体、解脲脲原体感染的早期诊断与有效防治，最终达到减少或抑制生殖道沙眼衣原体、解脲脲原体感染流行的目的。
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