王福厚，葛生虎
（1.甘肃省畜牧工程职业技术学院，甘肃 武威 733006；
2.河北铭诸生物科技有限公司，河北 邢台 054000）
猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV）又称为猪蓝耳病病毒，其感染猪后可引起猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS）。不同发育阶段猪群感染猪繁殖与呼吸综合征后所表现的临床特征差异明显，但主要以妊娠母猪繁殖障碍和其它不同发育阶段猪群高热为主[1]，此外，该病原感染宿主后可造成严重的免疫抑制，导致疫苗免疫效果不佳，且容易出现继发感染其它病原，给猪场造成严重的经济损失[2]。
PRRSV首次报道于美国（1987年），其后该病原受到广泛关注，且其它地区相继报道该病原的出现。1995年末我国首次报道PRRS的流行；
2006年国内诸多地区流行高致病性猪繁殖与呼吸综合征（HP-PRRS），感染该病猪群可出现极高的病死率，一度给部分养猪企业造成毁灭性打击[1]。其后，2013—2014年，国内再次流行NADC30-like毒株；
且2017年我国辽宁省来源猪病料样品中检测到NADC34-like毒株的存在，这意味着目前国内PRRSV流行毒株基因型具有很高的多样性和复杂性[3]。不同基因型PRRSV毒株感染临床表现和病理变化等存在较大差异，采用分子生物学技术对PRRSV毒株进行基因型鉴定十分必要，其可为PRRS的早期诊断与防控提供科学依据。
为了解当前河北省PRRSV流行情况及基因型分布特征，本研究于2022年1—6月从河北8个市共采集疑似PRRS感染病猪组织样品315份，采用荧光定量RT-PCR法检测PRRSV流行情况，其后使用不同基因型PRRSV鉴别诊断荧光定量RT-PCR试剂盒对部分PRRSV阳性毒株基因型进行鉴定，为该地区PRRS的防控提供科学依据。
1.1 样品来源
2022年1—6月，从河北邢台市（63份）、邯郸市（87份）、石家庄（55份）、衡水市（38份）、保定市（16份）、沧州市（37份）、廊坊市（6份）和张家口市（13份）共采集疑似PRRS感染病猪组织样品共315份，组织样品包括淋巴结、肺脏、流产胎儿等。组织病料采集后保存于封口袋，低温冷藏送至河北铭诸生物科技有限公司进行病原检测。
1.2 临床样品处理及检测
采取常规操作流程处理组织样品[4]，采用RNA/DNA基因组提取试剂盒提取组织样品基因组，其后采用cDNA反转录试剂盒将基因组中RNA反转录为cDNA，保存于-20 ℃，待检。
以cDNA基因组为模板，以商业化猪繁殖与呼吸综合征病毒通用型荧光RT-PCR检测试剂盒（洛阳莱普信息科技有限公司产品）检测基因组中是否存在PRRSV核酸，每次检测均设置阳性和阴性对照。操作步骤及反应条件参考试剂盒说明书进行。若样品Ct值小于或等于35则判定为阳性；
Ct值大于38则判定为阴性；
Ct值为35～38，则为可疑。
1.3 部分PRRSV阳性毒株基因型确定
为确定河北省部分地区流行PRRSV毒株基因型特征，分别采用猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型经典株/高致病性/NADC30株核酸荧光定量RT-PCR检测试剂盒（杭州博日科技股份有限公司产品）和NADC34株核酸荧光定量RT-PCR检测试剂盒（杭州博日科技股份有限公司产品）对28份PRRSV阳性样品毒株基因型进行分型。检测体系、操作流程及结果判定均严格参考各试剂盒说明书，且每次检测均设置阳性和阴性对照。
2.1 河北省部分地区PRRSV流行病学调查结果
为初步调查当前河北省PRRSV流行情况，本研究于2022年1—6月从河北部分地区采集疑似PRRS感染猪组织样品共315份，采用荧光定量RTPCR法检测样品中是否存在PRRSV核酸。结果如表1所示，共58份样品为PRRSV核酸阳性，平均检出率为18.41%。不同地区均检出PRRSV阳性样品，但检出率存在差异，其中以石家庄样品检出率最高，为30.91%（17/55），而邯郸、沧州和张家口样品检出率较低，分别为12.64%（11/87）、13.51%（5/37）和7.7%（1/13）。
表1 河北省不同地区PRRSV分子流行病学调查结果
2.2 不同类型样品PRRSV核酸检出情况
在本研究中，收集的315份临床样品按照流产胎儿（繁殖障碍性疾病）、肺脏和淋巴结（呼吸障碍综合征）进行区分，对比不同类型临床样品PRRSV核酸检出率。结果发现，妊娠母猪繁殖障碍性疾病来源组织样品（流产胎儿）PRRSV核酸检出率较呼吸障碍综合征来源组织样品（如肺脏和淋巴结）高，其阳性率分别为21.33%（45/211）和12.50%（13/104），见表2。
表2 不同类型样品PRRSV核酸检出情况
2.3 河北省部分地区PRRSV流行株基因型分布特征
为进一步确定河北省部分地区流行PRRSV毒株基因型，笔者使用两种试剂盒分别对28个PRRSV毒株基因型进行鉴定。结果如表3所示，河北省同时流行4种不同基因型，分别为经典型、高致病型、NADC-30 like毒株和NADC-34 like毒株，但所占比例差异较大，其中以高致病型和经典型所占比例更高，分别为42.86%（12/28）和35.71%（10/28）；
而NADC30-like毒株和NADC34-like毒株所占比例稍低，分别为17.86%（5/28）和3.57%（1/28）。
表3 河北省部分地区PRRSV流行株基因型分布特征
近年来，河北省生猪养殖业无论是出栏量还是养殖模式都发生了很大的变化，同时对疫病防控也更加严格。然而，PRRS仍然还广泛流行于河北省各地区，特别是近年来新的PRRSV基因型毒株频发，且不同基因型毒株对患猪致病力存在差异，这无疑给当地生猪养殖业发展带来巨大的威胁，同时调查PRRSV流行情况和不同基因型分布情况对该病的防控也可提供科学的依据[2-3]。
本研究近期对河北省部分疑似感染PRRS猪病料样品进行PRRSV病原检测。其结果发现，近20%临床组织样品为PRRSV核酸阳性，且各地区送检样品中均存在阳性样品，说明目前该病原已广泛流行于河北各地区。此外，这也说明目前河北省生猪养殖业面临的猪病病原种类繁多，导致疑似PRRS感染临床症状（如流产、高热等）可能不是PRRSV感染引起，这也提示实验室诊断的必要性和可靠性。
为进一步确定河北省部分地区流行PRRSV毒株基因型，笔者使用两种试剂盒对部分PRRSV毒株基因型进行鉴定。结果发现，河北省同时流行4种不同基因型，分别为经典型、高致病型、NADC-30 like型和NADC-34 like型毒株，但所占比例差异较大，其中高致病型和经典型毒株仍然是优势毒株，而后两种毒株比较少见，这可能与检测样品数量较少有关。以上结果说明，河北省流行PRRSV毒株基因型十分复杂，同时需要警惕新型毒株（如NADC-34 like株）的进一步流行，也提示定期监测河北省各地区或猪场流行PRRSV基因型特征是十分必要的。
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